Cellular expression and localization of CRK 1 and 3 in Trypanosoma cruzi

• Grant number: 22/03343-5
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
• Start date: May 01, 2022
• End date: July 31, 2022
• Field of knowledge: Biological Sciences - Parasitology - Protozoology of Parasites
• Principal Investigator: Simone Guedes Calderano
• Grantee: Evelin Mariani Gonçalves
• Host Institution: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brazil
• Associated research grant: 21/01013-5 - CRKs (Cdc2 Related Kinases) in Trypanosoma cruzi: unraveling their role in proliferation, metacyclogenesis and crosstalk between proliferation and cellular metabolism, AP.R

Abstract

Neste projeto serão analisadas a expressão proteica das enzimas CRK 1 e CRK3 ao longo do ciclo celular e nas diferentes fases do ciclo de vida de Trypanosoma cruzi (cepa Dm28c). Além disso será avaliada a localização celular por meio de ensaio de imunofluorescência nas diferentes formas de vida de T. cruzi. Para tanto será utilizada a técnica de genética reversa CRISPR/Cas9 a fim de adicionar sequencias de epitopos tag na porção 5' dos genes das enzimas CRK1 e CRK3. Desta forma estas enzimas serão expressas conjugadas ao epítopo tag na sua porção N terminal. Estas modificações permitirão o estudo das enzimas utilizando anticorpos comerciais contra o epítopo tag específico (Myc, TY ou HÁ) nos ensaios de western blotting e imunofluorescência. (AU)