Development of techniques and methodologies for enzymatic cleavage of monoclonal and polyclonal antibodies against target antigens based on structural biology analyzes and biophysical dynamics

• Grant number: 23/01494-9
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
• Start date: March 01, 2023
• End date: March 31, 2024
• Field of knowledge: Biological Sciences - Biochemistry - Molecular Biology
• Agreement: SEBRAE-SP
• Principal Investigator: Raul de Macedo Queixada
• Grantee: Victor Bolsanelli Cioffi
• CNAE: Serviços de engenharia
• Associated research grant: 22/08231-0 - Development and validation of a point of care system for measuring cardiac troponin levels in blood, AP.PIPE

Abstract

A partir de anticorpos monoclonais e policlonais, específicos contra antígenos alvo, testes de clivagem enzimática por pepsina e papaína serão realizados com o intuito de se obter a máxima eficácia da reação e gerar fragmentos Fab e F(ab)2 em alto teor de rendimento. Metodologias de cromatografia serão utilizadas para a obtenção dos fragmentos individualizadas, como filtração em concentradores com cutoff de 30kDa, uso de resinas conjugadas a proteína A e colunas de exclusão molecular por tamanho. Os antígenos serão produzidos de forma heteróloga em procariotos, após análises de bioinformática com o uso de softwares especializados, concomitantemente análises de expressões, selecionando cepas, tampões, técnicas de lise, metodologias de cromatografia e polimentos por cromatografia por tamanho. Após a produção das proteínas e clivagem dos anticorpos, testes de imunorreatividade serão realizados por metodologias de ELISA e Western Blotting, validando a eficácia de reconhecimento antígeno-anticorpo e também verificando a titulação de reconhecimento. Posteriormente a conclusão dos processos, o aumento gradual de escala será implementado diretamente proporcional a demanda. (AU)