Mecanismos de ajuste do relógio por luz e temperatura: aspectos filogenéticos

Resumo

Nosso grupo de pesquisa vem estudando a fisiologia de fotopigmentos e de genes de relógio em modelos celulares de diversas classes de vertebrados desde 2001. Neste período o grupo publicou diversas descobertas sobre o mecanismo de ação de luz e hormônios sobre a expressão do fotopigmento melanopsina e de genes de relógio em cada um dos modelos estudados. O presente projeto surge então, como a continuação da vertente adotada pelo laboratório, e visa ampliar o escopo de estudo das vias sensoriais envolvidas nos projetos passados a fim de elucidar a interação dos sistemas de detecção luminosa, detecção de temperatura e sistema circadiano. São objetivos deste projeto: (1) investigar luz e temperatura como agentes sincronizadores do relógio (expressão de genes de relógio por Lumicycle e/ou PCR tempo real) em linhagens de teleósteo, anfíbio, ave e mamífero; (2) identificar quais canais TRP são afetados por luz e temperatura (por nanostring e/ou PCR tempo real) em linhagens de teleósteo, anfíbio, ave e mamífero; (3) identificar os mecanismos dessa atividade, avaliando: a) efeito do bloqueio com antagonistas e/ou silenciamento por RNAi de canais TRP sobre genes do relógio; b) efeito do silenciamento das melanopsinas por RNAi sobre genes do relógio; c) efeito do bloqueio da proteína ancoradora INAD sobre genes do relógio; (4) avaliar em modelos in vivo de homeotermos (Mus musculus) o papel dos canais TRP V1 usando antagonista i.p. e avaliando RNAm de genes de relógio em tecidos periféricos em animais em repouso e em exercício; (5) avaliar em modelos in vivo de ectotermos (Danio rerio) o papel dos canais TRP avaliando RNAm de genes de relógio em tecidos periféricos de animais selvagens e nocautes submetidos a variação de temperatura. (AU)