Avaliação da permeabilidade endotelial para estudos da patogênese da dengue e triagem de compostos com potencial terapêutico

Resumo

O extravasamento plasmático é um dos principais sinais de alerta da infecção pelo vírus da dengue (DENV) e está relacionado com a severidade da doença. A patogênese da dengue é complexa e multifatorial, envolvendo fatores virais e do hospedeiro. Além disso, a escassez de modelos animais que representem satisfatoriamente a fisiopatologia da doença em humanos limita os avanços no entendimento do seu mecanismo e dificulta o desenvolvimento de fármacos e vacinas para dengue. Estudos têm mostrado que os monócitos compõem o conjunto de células responsáveis pela resposta imune à infecção pelo DENV, produzindo mediadores que interagem com o endotélio aumentando o extravasamento vascular em humanos. Este projeto visa à implantação de um modelo de avaliação da permeabilidade vascular in vitro em um sistema de cocultura de células endoteliais e monócitos infectados pelo DENV para estudar fatores envolvidos no extravasamento vascular e testar possíveis fármacos que possam inibir este processo. A metodologia envolve o cultivo de células endoteliais sobre insertos de membranas microporosas dispostos em placas de cultura formando dois compartimentos, apical e basolateral. Neste sistema, as células infectadas pelo DENV produzirão citocinas e mediadores que irão interferir com a permeabilidade vascular in vitro, semelhantemente ao que ocorre in vivo. Através da adição de dextrana fluorescente no lado apical e medição da sua transferência para o lado basolateral a permeabilidade vascular pode ser quantificada. Desta maneira, é possível fazer a triagem de compostos com potencial terapêutico na dengue, estudar a interferência na permeabilidade vascular por diferentes isolados clínicos do DENV e avaliar o perfil de produção de citocinas em reposta a infecção para melhor entender os fatores que interferem na patogenia da dengue grave. (AU)