Fatores de transcrição bacterianos envolvidos em homeostase de metais, estresse oxidativo e virulência: investigando como Chromobacterium violaceum muda do ambiente para o hospedeiro

Resumo

As bactérias possuem mecanismos sofisticados para sobreviver em ambientes hostis. Os patógenos bacterianos devem lidar com condições severas de estresse dentro do hospedeiro, como estresse oxidativo e limitação dos metais essenciais ferro, zinco e manganês. Este projeto visa desvendar como o patógeno oportunista ambiental Chromobacterium violaceum coordena as respostas adaptativas da homeostase de metais e defesa antioxidante com a expressão de fatores de virulência para sobreviver no hospedeiro. Construiremos uma biblioteca de mutantes por inserção de transposon em C. violaceum e um modelo alternativo de infecção usando Galleria mellonella. A biblioteca será rastreada em G. mellonella para descobrir novos fatores de virulência de C. violaceum e em placas CAS para identificar novos fatores de transcrição envolvidos em redes regulatórias de sideróforos. O sequenciamento de RNA (RNA-seq) será utilizado para identificar as respostas de C. violaceum à infecção intracelular, à limitação de metal mediada pela proteína de defesa do hospedeiro calprotectina e à intoxicação por heme e manganês. Os regulons de vários fatores de transcrição de C. violaceum envolvidos com a homeostase de metal, estresse oxidativo e virulência serão determinados por RNA-seq e ChIP-seq. As linhagens mutantes nulas serão utilizadas para caracterizar (I) o papel de transportadores para a captação ou efluxo de ferro, heme, zinco e manganês; (II) o papel da glutationa e do sistema GarAB na defesa contra metal e estresse oxidativo; (III) o papel do sistema de secreção do tipo VI (T6SS) na captação de metais; (IV) o papel de fatores de transcrição na formação de biofilme e resistência a antibióticos. Os dados obtidos neste projeto deverão revelar estratégias bacterianas para superar a imunidade nutricional do hospedeiro. (AU)