| Processo: | 12/09633-3 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de agosto de 2012 |
| Data de Término da vigência: | 31 de julho de 2014 |
| Área do conhecimento: | Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica |
| Pesquisador responsável: | Samuel Katsuyuki Shinjo |
| Beneficiário: | Samuel Katsuyuki Shinjo |
| Instituição Sede: | Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | São Paulo |
| Pesquisadores associados: | Miyuki Uno ; Sueli Mieko Oba Shinjo ; Suely Kazue Nagahashi Marie |
| Assunto(s): | Reumatologia Dermatomiosite Polimiosite Expressão gênica |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | biópsia muscular | dermatomiosite | expressão gênica | miopatias inflamatórias | polimiosite | Reumatologia |
Resumo
Dermatomiosite (DM) e polimiosite (PM) são um grupo heterogêneo de miopatia autoimune crônica, sistêmica, associada a uma alta morbidade e incapacidade funcional. Sob o ponto de vista imunopatológico, na PM há primariamente infiltrado de linfócitos T CD8(+) e macrófagos nas fibras musculares. Estas, por sua vez, expressam altos níveis de antígenos MHC classe I e liberam grânulos de perforina, resultando em lise das próprias fibras musculares. Na DM, as células B desempenham um papel relevante na patogênese da doença pela presença de autoanticorpos, deposição de imunocomplexos em junção dermoepiderme das lesões cutâneas e presença de células B em músculos inflamados e áreas perivasculares. Adicionalmente, deposições de complemento e imunoglobulina nos endotélios perifasciculares podem levar a isquemia e atrofia muscular, mostrando a importância da imunidade humoral. A ativação, quimiotaxia e invasão destas células do sistema imunológico nos tecidos musculares, assim como a amplificação do processo inflamatório, são mediadas pelas diversas citocinas e quimiocinas presentes localmente que, por sua vez, são produzidas pelas células do sistema imunológico, células endoteliais e fibras musculares.Baseando-se na imunopatogênese de DM/PM, é importante o estudo das citocinas pró-inflamatórias (e de outras proteínas) para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na lesão dos tecidos musculares e sua correlação com as manifestações clinicolaboratoriais iniciais da doença, bem como a evolução e o prognóstico dos pacientes com DM/PM. No presente estudo, serão analisadas 50 biópsias musculares realizadas de rotina para investigação e diagnóstico de DM/PM dos pacientes provenientes do nosso Serviço. Além de levantamento de dados demográficos e clinicolaboratoriais, serão realizadas análises de expressão gênica. Do tecido muscular armazenado será extraído RNA total, o qual será transcrito reversamente em cDNA. Os níveis de expressão dos genes envolvidos com o processo inflamatório, isquemia e atrofia muscular serão analisados por PCR quantitativo em tempo real e comparado com amostras controles pareados por sexo e idade (biópsia muscular com achados morfológicos normais pela histologia). As reações serão realizadas utilizando-se oligonucleotídeos sintetizados para cada gene pelo método de incorporação de Sybr Green. Os oligonucleotídeos serão desenhados em exons diferentes para evitar amplificações inespecíficas de DNA. Os dados quantitativos serão normalizados em relação a genes constitutivos como controles internos. A equação 2-DDCt será utilizada para o cálculo da expressão relativa dos genes nas amostras de músculo dos pacientes em relação às amostras normais. Os dados de expressão relativa dos genes analisados serão correlacionados com dados clinicolaboratoriais, evolução clínica dos pacientes e pelo grau de comprometimento e de infiltrado inflamatório no tecido muscular. (AU)
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