A dinâmica do desenvolvimento das células germinativas caninas

• Processo: 18/03810-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2018
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Daniele dos Santos Martins
• Beneficiário: Daniele dos Santos Martins
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Assunto(s): Embriogênese animal Células germinativas embrionárias Canis Cães Publicações de divulgação científica Artigo científico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: canine | embryonic development | germ cell | Reprodução de Pequenos Animais

Resumo

Células Germinativas Primordiais (PGCs) são precursores de gametas que podem gerar novos indivíduos ao longo da vida em machos e fêmeas. Além disso, PGCs foram programadas para se diferenciar em células germinativas embrionárias (EGCs) após o cultivo in vitro. A maioria dos estudos que investiga células germinativas foram realizados em roedores e humanos, mas não em cães (Canis lupus familiaris). Assim elucidamos a dinâmica da expressão de marcadores de pluripotência (POU5F1 e NANOG), germinativo (DAZL DDX4, DPPA E3) e epigenéticos (5mC, 5hmC, H3K27me3 e H3K9me2) os quais são importantes para o desenvolvimento de células germinativas caninas masculinas durante o início (22-30 dias pós-fertilização (DPF), meio (35-40 dpf) e final (45-50 dpf) de gestação. Realizamos a caracterização genotípica de sexo, imunofluorescência, imuno-histoquímica e análises quantitativa de reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa (RT-qPCR). Além disso, em um estudo preliminar, avaliamos a capacidade do embrião canino (PGCs 30 dpf) para diferenciar-se em EGCs. Para confirmar o fenótipo canino da EGCs, realizamos a analises de fosfatase alcalina, detecção imuno-histoquímica, microscopia de varredura e de transmissão de elétrons e RT-qPCR. As PGCs foram positivas para POU5F1 e H3K27me3 avaliados durante todos os períodos de desenvolvimento, incluindo todos os períodos entre o tecido gonadal e estágio de desenvolvimento fetal de testículos. O número de NANOG, DDX4, DPPA, DAZL3 e 5mC-células positivas aumentou junto com o desenvolvimento dos cordões da fase de 35-50dpf. Além disso, nossos resultados demonstram que é viável induzir as PGCs caninas em EGCs, pois apresentam marcadores pluripotentes, como POU5F1 e o gene NANOG, e apresentam menor expressão dos genes germinativo e aumento da expressão do H3K27me3. Este estudo fornece novas ideias sobre os mecanismos de desenvolvimento de células germinativas masculinas em cães. (AU)