Expressão e purificação de fatores de transcrição de Chromobacterium violaceum

• Processo: 13/18797-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: José Freire da Silva Neto
• Beneficiário: Kelly Cristina Martins Barroso
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/20435-9 - Fatores de transcrição de Chromobacterium violaceum: integrando vias de sinalização, regulons e patogenicidade, AP.JP
• Assunto(s): Genética molecular Regulação da expressão gênica Fatores de transcrição Cisteína Chromobacterium violaceum Mutagênese Virulência Técnicas in vitro Cromatografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Chromobacterium violaceum | expressão proteínas | fatores de transcrição | Regulação gênica | Regulação Gênica

Resumo

Os fatores de transcrição selecionados nos ensaios de patogenicidade deverão ser clonados em vetores de expressão para produção de proteínas recombinantes que serão utilizadas em ensaios in vitro de ligação ao DNA. Os genes serão clonados em vetor de expressão e as proteínas fusionadas a cauda de histidina serão induzidas com IPTG. A purificação será feita por cromatografia de afinidade. Serão obtidas também proteínas recombinantes mutantes, cada uma com resíduos de cisteína substituído por serina através de mutagênese sítio-dirigida. Estas proteínas purificadas serão de extrema importância em várias ensaios in vitro que permitirão determinar, por exemplo, se os genes do regulon de cada fator de transcrição são regulados diretamente por ele e se esta regulação envolve cisteínas reativas dos reguladores.(AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ALVES, JULIA A.; PREVIATO-MELLO, MARISTELA; BARROSO, KELLY C. M.; KOIDE, TIE; DA SILVA NETO, JOSE F.. The MarR family regulator OsbR controls oxidative stress response, anaerobic nitrate respiration, and biofilm formation in Chromobacterium violaceum. BMC Microbiology, v. 21, n. 1, NOV 4 2021. (20/00259-8, 12/20435-9, 16/08728-1, 13/18797-2, 13/25745-9)