Caracterização funcional de fatores de transcrição da família MarR de Chromobacterium violaceum

Resumo

A expressão gênica pode ser modulada por fatores de transcrição que atuam diretamente como sensores de sinais intracelulares ou via transdução de sinais do meio externo. Os fatores de transcrição da família MarR, encontrados em Bacteria e Archaea, atuam como sensores diretos para diferentes sinais, controlando virulência, reposta ao estresse oxidativo, resistência a antibióticos e vias de catabolismo. Apesar de existirem vários candidatos a reguladores da família MarR em Chromobacterium violaceum, apenas OhrR, envolvido na resistência a peróxidos orgânicos, foi estudado por nosso grupo. Assim, propomos identificar e caracterizar fatores de transcrição da família MarR que controlam virulência nesse patógeno oportunista de humanos, buscando elucidar os sinais de ativação e os genes sob regulação de cada fator de transcrição. Para isto, iremos identificar os fatores de transcrição da família MarR no genoma de C. violaceum, classificá-los quanto a presença de cisteínas conservadas e realizar mutagênese sistemática para deleção da maioria dos genes que codificam estes reguladores. O fenótipo de cada linhagem mutante será caracterizado por meio de ensaios de crescimento e testes de virulência no modelo camundongo. Os regulons de alguns destes fatores de transcrição, principalmente os envolvidos em virulência, serão definidos por meio de microarranjos de DNA e análises bioquímicas, como ensaios de ligação ao DNA e mutagênse sítio-dirigida de cisteínas conservadas. Assim, desta análise sistemática de reguladores da família MarR em C. violaceum, pretendemos contribuir para encontrar novos reguladores de virulência bacterianos.