Clonagem, expressão e caracterização de proteínas do tipo HtrA de Leptospira interrogans

• Processo: 17/01411-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2017
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Brenda Daroz
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 14/50981-0 - Busca de proteínas de superfície nas sequências do genoma da Leptospira interrogans: caracterização funcional e imunológica para o entendimento de mecanismos envolvidos na patogênese de bactéria, AP.TEM
• Assunto(s): Genômica funcional Leptospirose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão de proteína recombinante | HtrA | leptospirose | Genomica funcional

Resumo

A leptospirose é uma zoonose de importância global recentemente incluída na lista das Doenças Tropicais Negligenciadas, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença por permitirem a colonização das leptospiras nos túbulos renais proximais e as excretarem vivas na urina. Segundo a Organização Mundial da Saúde, o número de casos clínicos anuais no mundo permanece subestimado e não há vacina eficaz até o momento. A identificação de proteínas de membrana externa conservadas entre cepas patogênicas são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade. São estas proteínas que estão envolvidas na interação das bactérias com o ambiente externo, podendo também servir de alvo para o sistema imune. Algumas espiroquetas se utilizam de proteases de membrana externa como um mecanismo de disseminação por tecidos do hospedeiro. Assim, o projeto propõe a clonagem e expressão de duas proteínas preditas como sendo do tipo HtrA identificadas por bioinformática no genoma de Leptospira interrogans. Os genes que codificam estas proteínas, LIC11111 e LIC1112, serão amplificados a partir do DNA genômico e o inserto clonado em vetor de expressão em E. coli. As proteínas recombinantes serão expressas com uma sequência de seis resíduos de histidina na região N-terminal para a purificação por cromatografia de afinidade a metal. Serão avaliados (a) atividade de imunogenicidade das proteínas em modelo animal, (b) reatividade das proteínas recombinantes frente a soros de pacientes diagnosticados com leptospirose e (c) interação dessas com macromoléculas do hospedeiro e seu potencial proteolítico sobre as mesmas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

NASCIMENTO FILHO, EDSON G.; VIEIRA, MONICA L.; TEIXEIR, ALINE F.; SANTOS, JADEMILSON C.; FERNANDES, LUIS G. V.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; ROSSINI, AMANDA; KOCHI, LEANDRO T.; CAVENAGUE, MARIA F.; et al. Proteomics as a tool to understand Leptospira physiology and virulence: Recent advances, challenges and clinical implications. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 180, n. SI, p. 80-87, MAY 30 2018. (17/01411-5, 17/06731-8, 14/50981-0, 17/01102-2, 16/11541-0, 16/04295-3, 16/01384-5)

TEIXEIRA, ALINE F.; FERNANDES, V, LUIS G.; CAVENAGUE, MARIA F.; TAKAHASHI, MARIA B.; SANTOS, JADEMILSON C.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; KOCHI, LEANDRO T.; VIEIRA, MONICA L.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. Adjuvanted leptospiral vaccines: Challenges and future development of new leptospirosis vaccines. Vaccine, v. 37, n. 30, p. 3961-3973, JUL 9 2019. (17/01411-5, 17/06731-8, 17/25167-6, 14/50981-0, 17/01102-2, 16/11541-0, 17/26223-7, 17/00236-5, 16/01384-5)

NASCIMENTO FILHO, EDSON G.; VIEIRA, MONICA L.; TEIXEIR, ALINE F.; SANTOS, JADEMILSON C.; FERNANDES, LUIS G. V.; PASSALIA, FELIPE J.; DAROZ, BRENDA B.; ROSSINI, AMANDA; KOCHI, LEANDRO T.; CAVENAGUE, MARIA F.; et al. Proteomics as a tool to understand Leptospira physiology and virulence: Recent advances, challenges and clinical implications. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 180, p. 8-pg., 2018-05-30. (14/50981-0, 17/01411-5, 17/01102-2, 16/01384-5, 16/04295-3, 16/11541-0, 17/06731-8)