Construcao de vetor adenoviral portando o cdna do gene xpg, e analise da mutacao de uma linhagem de celulas xpg-/-.

• Processo: 04/03988-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2004
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Daniela Tathiana Soltys
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 03/13255-5 - Genes de reparo de DNA: análise funcional e evolução, AP.TEM
• Assunto(s): Reparo do DNA Xeroderma pigmentoso Adenovirus Mutação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adenovirus | Luz Ultravioleta | Mutacao | Reparo De Dna | Xeroderma Pigmentosum | Xpg

Resumo

Existe uma variedade de agentes lesivos ao DNA, tanto de origem endógena como ambiental. Para preservar seu patrimônio genético, os organismos contam com uma complexa e intrincada rede de vias de reparo de DNA. Entre essas, destaca-se o NER (Nucleotide Excision Repair), pela sua capacidade de reparar uma ampla variedade de lesões no DNA. Participam do NER diversas proteínas, entre elas a endonuclease XPG. Pacientes que apresentam essa proteína mutada apresentam a síndrome Xeroderma Pigmentosum (XP), ou até mesmo XP combinada com a síndrome de Cockayne, se uma segunda função (ainda não esclarecida) dessa proteína for alterada pela mutação. A fim de contribuir para a elucidação dos mecanismos envolvidos no reparo de DNA, em especial a função da proteína XPG nesses processos, primeiramente propomos investigar a natureza da mutação de fibroblastos oriundos de um paciente brasileiro, que através de testes de complementação gênica é sabidamente deficiente em XPG. Dentro desse projeto, e como linha principal, pretendemos também construir adenovírus recombinantes portando o cDNA do gene xpg, fusionado com o gene repórter egfp, e realizaremos testes de complementação para verificar se células XPG-/- recuperam a atividade ao serem infectadas por esses adenovírus. Também verificaremos a dinâmica dessa proteína no núcleo de células proficientes e deficientes em reparo de DNA, após serem irradiadas por luz ultravioleta (UV). Esperamos, assim, contribuir com os estudos de reparo de DNA, processo fundamental para a manutenção do equilíbrio da vida. (AU)