Expressão de proteínas e genes pró e anti-apoptóticos na mielofibrose e trombocitemia essencial

Resumo

Doenças mieloproliferativas crônicas (DMPC) são resultantes da expansão clonal da célula tronco hematopoiética e caracterizam-se peta independência dos progenitores hematopoiéticos a várias citosinas e proliferação exacerbada da linhagem mielóide com maturação preservada. Este projeto terá como foco a Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose (MF), pois os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na patogênese e progressão dessas DMPC permanecem desconhecidos. O tratamento das DMPC é paliativo e não altera o curso da doença, a única opção potencialmente curativa é o transplante alogênico de medula óssea, o qual se limita a pacientes jovens sem co-morbidades graves. O acúmulo das células da linhagem mielóíde presente nessas doenças parece estar associado à alteração da do controle da apoptose celular, no qual há participação direta das proteínas pró- é anti-apoptóticas. Esse estudo investigará os mecanismos celulares e moleculares que regulam a apoptose das células precursoras é leucócitos maduros em pacientes com. TE e MF, Os objetivos dessa investigação serão avaliar a expressão de genes e proteínas pró- e anti-apoptóticas da família Bcl-2 e da via extrínseca da apoptose celular, de microRNAs que possuam como alvos genes reguladores da apoptose e a detecção da ativação de vias de sinalização celular relacionadas com JAK/STAT e seus efeitos na expressão de moléculas participantes no processo de morte celular em leucócitos e células precursoras CD34+ de pacientes e indivíduos saudáveis. A expressão gênica, de microRNAs e detecção da mutação JAK2 será realizada pelo método de PCR em tempo real, a ativação das vias de sinalização e a expressão das proteínas por Western-blot. Os ensaios de quantificação da apoptose serão realizados pelos métodos de anexina-FITC e HFS por citometria de fluxo. Os resultados serão correlacionados à percentagem de alelos mutados para JAK2 e aos dados clínico-laboratoriais dos pacientes. Os dados obtidos poderão contribuir para o melhor entendimento da fisiopatologia da MF e TE e, provavelmente no futuro, possibilitar o desenho de novos alvos terapêuticos e marcadores de prognóstico. (AU)