Caracterização proteômica comparativa da agregação plaquetária induzida pela trombina e pela PA-BJ, uma serinoproteinase do veneno da Bothrops jararaca.

Resumo

A PA-BJ é um serinoproteinase do veneno da Bothrops jararaca que induz agregação plaquetária em plasma rico em plaquetas e em suspensões de plaquetas lavadas. O efeito da PA-BJ em plaquetas é mediado pelos receptores de trombina PAR1 e PAR4, que são receptores plaquetários acoplados à proteína G. A PA-BJ cliva in vitro o exodomínio recombinante do receptor PAR1 nas ligações Arg41-Ser42 e Arg46-Asn47, resultando na inativação do "tethered ligand". Ainda, a PA-BJ promove a liberação de cálcio em fibroblastos transfectados com o receptor PAR4 e tornam estas células insensíveis à ação da trombina. Sua seqüência de aminoácidos foi determinada por técnicas de química de proteínas e apresenta um sítio de N-glicosilação e um de O-glicosilação. Já foram identificadas pelo menos oito isoformas de PA-BJ com diferenças de massa molecular e ponto isoelétrico e provavelmente diferenças entre seus resíduos de aminoácidos e diferentes graus de glicosilação. Com o objetivo de entender melhor os eventos de sinalização causados pela clivagem do receptor PAR1 pela PA-BJ, pretendemos neste projeto utilizar algumas abordagens proteômicas e fosfoproteômicas para analisar o proteoma de plaquetas ativadas pela PA-BJ e pela trombina. Este estudo deverá resultar na geração de novos conhecimentos sobre a interação de serinoproteinases com seus substratos macromoleculares e a descrição de novas vias de sinalização celular em plaquetas.