Investigação da interação parasito-hospedeiro: explorando modelos de estudo de virulência e tropismo

Resumo

O objetivo desse projeto é investigar fatores e processos envolvidos na atenuação e no tropismo de Leishmania no hospedeiro vertebrado. Dois projetos compõem a proposta. No primeiro, estudaremos o processo de atenuação de um mutante de Leishmania major superexpressor do gene que codifica para o Spliced Leader RNA (SL RNA) quanto aos mecanismos envolvidos na ação imunomoduladora desse mutante e ao seu potencial vacinal. O mutante é alvo de estudos há vários anos no laboratório e a caracterização molecular feita demonstra a relação entre a atenuação da virulência in vivo e a presença do SL RNA ectópico. Configurar o perfil da resposta imune de hospedeiros com diferentes backgrounds genéticos é de grande relevância para examinar o potencial emprego do mutante como ponto de partida para geração de uma linhagem de Leishmania que sirva como vacina viva. O segundo projeto tem como objetivo investigar fatores associados ao tropismo/infectifivadade de L. braziliensis. Para esse estudo utilizaremos quatro isolados do parasito provenientes de lesão cutânea e de mucosa de dois pacientes para os quais padrões diferenciais de expressão gênica já foram analisados. A Prostaglandina F2 alfa sintase encontra-se em níveis aumentados nos dois isolados cutâneos avaliados, sendo não detectável em seus pares de lesão mucosa. Observamos que os isolados de LC têm maior capacidade de multiplicação e que a proteína é classificada como um potencial alvo de agentes quimioterápicos (http://tdrtargets.org/). Assim, nossa proposta é validar geneticamente a relevância da proteína para a sobrevivência e perfil de infecção do parasito in vitro e in vivo, pela geração e análise funcional de mutantes de Leishmania superexpressores e nocauteados para o gene. Em paralelo, a proteína expressa em sistema heterólogo (já disponível) vai ser empregada para gerar anticorpo para determinação de distribuição intracelular e/ou secreção de PGFS. A proteína heteróloga também será purificada para sua cristalização, importante para a busca de compostos líderes visando o desenvolvimento futuro de agente quimioterapêutico. (AU)