Avaliação in vivo do efeito do preparo químico-mecânico sobre microrganismos e endotoxinas em infecções endodônticas persistentes e suscetibilidade antimicrobiana dos Enterococcus spp. isolados

Resumo

A comunidade microbiana da infecção endodôntica persistente e/ou secundária caracteriza-se em microrganismos resistentes à terapia endodôntica. Os objetivos do presente estudo serão: a) Identificar bactérias do gênero Enterococcus spp. no canal radicular de dentes com insucesso endodôntico e lesão periapical através do método de cultura microbiana; b) Detectar através do método de PCR espécie específico Enterococcus faecalis, E. faecium, Parvimonas micra, Actinomyces israelii, Propionibacterium propionicus, Treponema denticola, T. socranskii, Porphyromonas endodontalis, P. gingivalis, Prevotella intermedia, P. tannerae e P. nigrescens; c) Detectar através do método de Nested PCR Enterococcus faecalis; d) Quantificar cepas viáveis e endotoxinas do canal radicular antes e após o preparo químico-mecânico (PQM); e) Correlacionar microrganismos detectados e níveis de endotoxinas com aspectos clínicos e radiográficos; f) Avaliar a suscetibilidade antimicrobiana de cepas clínicas de Enterococcus faecalis; g) Analisar os fatores de virulência de E. faecalis isoladas utilizando PCR para detecção da presença dos genes esp, gel/E, ace, asa, asa373, efaA. Serão realizadas coletas antes e após PQM de 15 canais radiculares de dentes com insucesso endodôntico, assintomáticos e presença de lesão periapical. As amostras serão diluídas, plaqueadas e incubadas. Após o período de incubação as colônias serão caracterizadas com o objetivo de verificar a presença do gênero Enterococcus spp. pelo método bioquímico. Espécies de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas serão investigadas através do método de PCR espécie-específico. Para a espécie E. faecalis também será utilizado Nested PCR. Níveis de endotoxinas serão quantificados no canal radicular através do teste turbidimétrico (Pyrogent 5000 LAL), investigando sua relação com os aspectos clínicos e radiográficos. As cepas clínicas de E. faecalis isoladas serão testadas quanto à suscetibilidade antimicrobiana através do método do E-test. Serão testados os antibióticos: benzilpenicilina, penicilina V, amoxicilina, amoxicilina + ácido clavulânico, eritromicina, azitromicina, vancomicina, cloranfenicol, tetraciclina, doxiciclina, ciprofloxacin, moxifloxacin e rifampicina. Reações de PCR também serão utilizadas para investigar determinantes virulentos nestas cepas de E. faecalis. Nesse caso, o DNA será isolado das cepas cultivadas, e serão utilizados primers específicos para detectar: substância de agregação (asa e asa373); adesinas de superfície ou fator de aderência (ace e esp); ativador de citolosina (cy/A) e gelatinase (Ge/E). Os dados serão tabulados no programa Excel e analisados estatisticamente pelo SPSS para Windows. (AU)