Avaliação das alterações proteômicas envolvidas na indução da transição epitelial-mesenquimal de células de câncer de mama pela superexpressão de fatores de transcrição

Resumo

O câncer de mama mata anualmente mais de 450 mil pessoas no mundo, sendo a sua metástase a responsável pela maioria das mortes causadas por este tipo de câncer. Assim, os métodos mais efetivos para a melhoria dos índices de morbidade e mortalidade por câncer são a detecção precoce, a prevenção e o tratamento da metástase. O fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT), que ocorre naturalmente durante a embriogênese e reparo tecidual, está envolvido também na progressão e metástase do câncer. A EMT induz complexas alterações nas células e no seu microambiente, como a diminuição dos contatos célula-célula, resultando na perda do caráter epitelial e aquisição de propriedades mesenquimais, que por sua vez conferem habilidades migratórias e invasivas a estas células. A EMT pode ser desencadeada por diversos sinais extracelulares, como componentes da matriz extracelular e fatores de crescimento, entre eles TGF-², HGF e PDGF. Além disso, a superexpressão de alguns fatores de transcrição como ZEB1, ZEB2, TWIST1, GSC, SNAIL, SLUG, FOXC1, e FOXC2, também induz a EMT in vitro. A fim de ampliar o entendimento dos complexos mecanismos moleculares da EMT modulados ao nível de proteínas, é proposta no presente projeto a análise proteômica detalhada da linhagem de adenocarcinoma de mama MDA-MB-231, induzida ao processo de EMT pela superexpressão estável dos genes ZEB1 e TWIST1. Os componentes proteicos da membrana, do núcleo e do citoplasma serão analisados quantitativamente através da técnica de marcação com isótopos de aminoácidos estáveis em cultura (SILAC), fracionamento de proteínas intactas e espectrometria de massas de alta resolução acoplada a cromatografia líquida (LC-MS/MS). Com esta análise detalhada, pretende-se identificar proteínas importantes para o processo de progressão e metástase do câncer de mama e que potencialmente sirvam como alvos para a inibição da metástase e/ou diagnóstico da doença.