Efeito da crotoxina sobre eventos fundamentais do processo angiogênico avaliado em matriz extracelular bidimensional e tridimensional: estudos in vitro

Resumo

Diversos estudos, in vivo e in vitro, demonstraram a atividade antitumoral da Crotoxina (CTX), toxina majoritária do veneno de Crotalus durissus terrificus. A angiogenese é um evento-chave nos processos da tumorigênese e da metástase. A formação de neovasos é o principal processo da angiogenese e envolve adesão, proliferação e migração das células endoteliais para atingir alvos distantes e para reorganização das células endoteliais nestes novos tubos capilares. Apesar das evidências da ação antitumoral da crotoxina, não foi demonstrado, até o momento, a ação desta toxina sobre eventos envolvidos com a neovascularização, essenciais para o crescimento e sobrevivência do tumor. Assim, estudos demonstrando a ação da crotoxina sobre parâmetros fundamentais para a neovascularização podem contribuir com a caracterização da ação antitumoral da CTX, além de contribuir para a elucidação de novos mecanismos de ação. Esse estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da CTX sobre a invasão e migração in vitro de células da linhagem endotelial tímica (tEnd.1), utilizando sistemas bidimensionais (2-D em gel de colágeno I contendo fibronectina) e tridimensionais (3-D em gel de colágeno I contendo fibronectina). Serão determinados os seguintes parâmetros: 1) a ação da CTX sobre a invasão da célula I t.END.1 na matriz extracelular, por meio do comportamento de adesão da célula endotelial aos seus ligantes naturais, tais como colágeno 1, fibrinogênio e fibronectina, utilizando ensaio de competição e a migração avaliada pelo método de Wound healing; 2) O comportamento migratório (velocidade e tipo de migração) das células t.End.1 em substrato 2-D e 3-D de 1 colágeno Tipo I, na presença de fibronectina, avaliados em tempo real por técnica de time-lapse; 3) ação da CTX sobre a formação de vasos induzidos em matrigel no modelo 3D; 4) a expressão das Rho GTPases (RhoA, Cdc42 e Rac 1) e da integrina α2β1 das células t.End.1, analisado ensaios de imunocitoquímica ; 5) a liberação de metaloproteases (MMP-2 e MMP-9) e de VEGF, após tratamento com a crotoxina, por meio de ensaio imunoenzimático (EIA). (AU)