Desenvolvimento, caracterização e estudos da autofagia e apoptose em modelo celular de Doença de Parkinson

Resumo

A principal característica patológica da Doença de Parkinson (DP) é a presença de agregados proteicos intracitoplasmáticos, chamados de Corpos de Lewy, sendo seu principal componente a proteína alfa-sinucleína. Na década de 1990 foram descritas duas mutações no gene que codifica a alfa-sinucleína (SNCA), estas mutações levam à transcrição de proteínas mutantes, a A30P e a A53T, ambas relacionadas a casos genéticos da DP. O aumento na concentração destas proteínas no citoplasma celular pode causar disfunções mitocondriais, já que é postulado que se liguem à membrana mitocondrial, onde inibem o complexo I da cadeia de elétrons, provocando o desacoplamento da mesma, com consequente queda do potencial de membrana, diminuição da síntese de ATP, aumento na sinalização mitofágica e indução do processo apoptótico. Nossos resultados prévios mostram que a alfa-sinucleína pode modular o processo mitofágico, inibir a autofagia e aumentar a apoptose. Assim o objetivo deste trabalho será estabelecer e caracterizar uma linhagem celular que superexpresse permanentemente a alfa-sinucleína selvagem ou suas mutantes A30P e A53T. Com o estabelecimento destas linhagens serão realizados estudos que buscam avaliar sua interação com estruturas mitocondriais, a caracterização da modulação do processo autofágico e mitofágico com a participação das proteínas PINK/Parkina e a investigação da participação do íon Ca2+ nestes processos. Para tanto serão utilizadas metodologias de produção e infecção lentiviral com vetores contendo o gene SNCA, microscopia de fluorescência de alta resolução em tempo e espaço reais, microscopia confocal de alta resolução e análise da expressão de proteínas por meio da técnica de Western Blot. O estudo destas vias celulares auxiliarão no melhor entendimento da patogenia da DP. (AU)