Investigação do efeito do silenciamento do IRS1/IRS2 no fenótipo de células hematopoiéticas primárias normais CD34+ e leucêmicas Bcr-Abl+

Resumo

A hematopoiese é regulada por citocinas e fatores de crescimento. A ação adequada das citocinas e dos fatores de crescimento depende, entre outros fatores, da ação de proteínas adaptadoras citoplasmáticas, como os substratos do receptor de insulina (IRS). A associação das proteínas IRS a seus receptores resulta na fosforilação do IRS em seus resíduos de tirosina na porção C-terminal, gerando sítios de ligação que recrutam proteínas efetoras que participam da sinalização celular das vias PI3K/AKT e MAP kinase. Os principais receptores capazes de ativar IRS1 e IRS2 são os receptores de insulina (IR) e IGF1 (IGF1R). Adicionalmente, o IRS2 pode ser ativado a partir da sua associação com os receptores de eritropoetina (EPOR) e trombopoetina (MPL), e o IRS1 pode ser ativado pela oncoproteína citoplasmática BCR-ABL. Apesar das vias PI3K/AKT e MAP kinase serem recrutadas na hematopoiese normal e desreguladas em neoplasias hematológicas a participação das proteínas IRS na ativação destas vias de sinalização na hematopoiese normal e leucêmica tem sido pouco estudada. O objetivo desse estudo é investigar o fenótipo das células hematopoiéticas normais CD34+ e células leucêmicas primárias BCR-ABL+ após o silenciamento de IRS1 e IRS2. Células hematopoiéticas normais CD34+ e de pacientes com diagnóstico de LMC silenciadas através da metodologia de lentivírus ou tratadas com NT157 (inibidor IRS1/IRS2) serão submetidas a estudos funcionais de diferenciação, e/ou proliferação e apoptose celular. A modulação da via PI3K/AKT/mTOR e MAP kinase nas células silenciadas ou não para IRS1/IRS2 será avaliada através de Western Blotting. (AU)