Aplicação da técnica de imagem in vivo, uma técnica central para estudos pré-clínicos, em modelo de fibrose pulmonar

Resumo

Nos últimos anos tem havido um grande avanço tecnológico no sentido de se desenvolver novos métodos não invasivos na experimentação animal, que permitam a avaliação dos processos inflamatórios e fibróticos sem a necessidade de se eutanaziar os animais. Nesse sentido, novas tecnologias, como os sistemas de imagem in vivo têm surgido, permitindo a avaliação cada vez mais detalhada, inclusive a nível molecular, dos processos inflamatórios e fibróticos. Esses sistemas permitem a captura e análise de imagens de fluorescência, multiplex fluorescência, luminescência, radioisotópica e também de raio-x. Na área de respiratória esses sistemas têm sido empregados de maneira cada vez mais abrangente, como por exemplo para detecção dos níveis pulmonares de adenosina trifosfato (ATP) e da expressão de NF-kB. Resumidamente, esses sistemas utilizam-se basicamente de células marcadas/transfectadas com luciferina ou fluorocromos para proteínas específicas e também de camundongos transgênicos para proteínas específicas, tendo como exemplo, os camundongos denominados de GFP (green fluorescent protein). Assim sendo, o presente projeto objetiva avaliar os níveis de ATP nos pulmões em um modelo de fibrose pulmonar induzida através da administração do sulfato de bleomicina utilizando-se da técnica de imagem in vivo. Os camundongos C57Bl/6 machos de 8 semanas de idade (n = 8/grupo) receberão o sulfato de bleomicina (1,5 U/kg) por via intra-traqueal e serão avaliados nos dias 0, 1, 2, 7, 14, 30 e 42 após a administração da bleomicina. Adicionalmente às medidas in vivo para detecção dos níveis de ATP, serão avaliados também o número de células no lavado broncoalveolar (contagem total e diferencial), além do número de neutrófilos e da quantificação das fibras de colágeno no parênquima pulmonar. Para as medidas in vivo de ATP, os camundongos receberão por via intra-traqueal as células HEK293-pmeLUC, as quais permitirão avaliar a bioluminescência através da luciferina. De maneira complementar, serão avaliados também os níveis de ATP no lavado broncoalveolar por quimioluminescência, com o intuito de comparar as metodologias utilizadas para a quantificação dos níveis de ATP nos pulmões, uma vez que estudos recentes têm demonstrado que o ATP é um importante mediador dos processos inflamatório e fibrótico nos pulmões. (AU)