Efeito do tratamento com inibidores de DNMTs e com antidepressivos sobre a metilação do DNA em genes candidatos envolvidos com a neurobiologia da depressão

Resumo

Recentemente tem sido atribuído um papel importante para os mecanismos epigenéticos, tal como a metilação do DNA que é regulada pelas DNMTs, na neurobiologia da depressão. Nesse sentido, demonstramos pioneiramente que drogas inibidoras da metilação do DNA apresentam efeito tipo-antidepressivo em animais submetidos a diferentes testes comportamentais (teste do nado forçado e suspensão pela cauda). Objetivos: Considerando que os inibidores de DNMTs apresentam mecanismo de ação diferente dos antidepressivos convencionais utilizados, este trabalho testará a hipótese de que essas drogas induzem o mesmo efeito comportamental, porém agudo e duradouro. Além disso, avaliaremos se o estresse seria capaz de induzir alteração nos níveis de RNAm e na metilação do DNA em diferentes genes associados a depressão e regulados por mecanismos epigenéticos (BDNF, TrkB, 5-HT1A, NMDA e AMPA) em diferentes estruturas encefálicas (hipocampo dorsal, ventral e córtex pré-frontal) e se tais alterações seriam atenuadas pelo tratamento com inibidores de DNMTs agudamente e antidepressivos cronicamente. Metodologia: Os ratos serão submetidos a choques inescapáveis (CI) ou habituação na caixa (Hab) e receberão injeção sistêmica de inibidores de DNMTs, 5-AzaD (0,1; 0,2 e 0,4 mg/Kg) ou RG108 (0,2; 0,4 e 0,6 mg/Kg), de antidepressivos, imipramina (15 mg/Kg) ou fluoxetina (20 mg/Kg) ou veículo, por 1 (grupo agudo) ou 7 dias (grupo crônico), sendo submetidos ao teste do desamparo aprendido no último dia (n=10-12 animais/ grupo). Adicionalmente, um grupo será submetido apenas ao pré-teste e receberá os tratamentos, sendo que a última injeção será administrada 1h antes do sacrifício (n=10-12 animais/grupo). Os animais serão anestesiados, decapitados e terão as estruturas encefálicas dissecadas para isolamento de RNA e DNA metilado para posterior quantificação por PCR em tempo real.