Mecanismos de regulação da expressão da proteína quinase C atípica PKMZ, e identificação do seu interactoma em contextos neurais específicos.

Resumo

O câncer de mama é uma doença frequente entre as mulheres, de comportamento clínico heterogêneo, e composto por uma vasta gama de perfis moleculares. Inserida neste contexto, a família da proteína quinase C, um conjunto de dez serina/treonina quinases, é de importância central, e está relacionada com inúmeras funções celulares. No entanto, o papel exato de cada isoenzima ainda não está bem definido nos diferentes subtipos desta doença. A identificação da atividade diferencial, localização subcelular e caracterização dos substratos das PKCs nos diferentes subtipos de câncer de mama são, portanto essenciais para o entendimento da biologia destes tipos de tumores. Recentemente nosso grupo desenvolveu anticorpos poli e monoclonais que reconhecem especificamente as PKCs clássicas (cPKCs) ativas, e com essa ferramenta inovadora em mãos nos propomos a estudar a atividade das cPKCs ativas em uma linhagem de câncer de mama com perfil molecular luminal estrogênio positiva (ER+), MCF-7, e em amostras de pacientes com esse tipo de tumor. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que as PKCsbI e bII são primordialmente expressas no núcleo das células MCF-7. Para detectar quais os possíveis substratos nucleares destas isoenzimas, realizaremos ensaios de imunoprecipitação e Bimolecular fluorescence complementation (BiFC). Ainda, observaremos neste modelo a fosforilação de resíduos específicos de histonas que atuam como importantes marcas epigenéticas, por meio de ensaios in vitro e de imunoprecipitação da cromatina, validando estes dados em pacientes com tumores de mama ER+. Desta forma, identificaremos proteínas que interagem com as cPKCs e podem se tornar futuros biomarcadores ou alvos terapêuticos.