Desenvolvimento, caracterização e aplicações de anticorpos específicos para as PKCs ativas

Resumo

Dados da literatura sugerem que um dos problemas para se estudar o papel das proteina quinase C (PKC) é o fato de que não existem ferramentas que possam distinguir especificamente as formas inativa das ativas das diferentes isoenzimas das PKCs. Diferentemente de outras quinases como, por exemplo, ERK e JNK em que a ativação das mesmas se dá por fosforilações da alça de ativação. As fosforilações sofridas pelas PKCs clássicas, em particular, fazem parte do processo de maturação/ enovelamento dessas quinases, não se correlacionando com a ativação das mesmas. A ativação completa das cPKCs se dá pela ligação a lipídeos ativadores e mudanças conformacionais que expõem os sítios de interação com o substrato e de ligação ao ATP. Com base nas mudanças conformacionais que ocorrem nas cPKCs perante a ativação das mesmas, nosso grupo desenvolveu anticorpos poli e monoclonais que reconhecem especificamente as cPKCs ativas. No presente projeto, desejamos continuar a caracterização desses anticorpos e, com essas ferramentas inovadoras em mãos, nos propomos a estudar a atividade e interação das cPKCs com seus substratos em uma linhagem de câncer de mama positivas para o receptor de estrogênio (ER+) e triplo negativos e em amostras de pacientes com esses sub-tipos de tumores. Também verificaremos a ativação das cPKCs e em outros modelos, utilizando estes anticorpos. (AU)