Análise dos efeitos dos hormônios relacionados ao estresse sobre o dano no DNA e transformação maligna de queratinócitos humanos de boca

Resumo

Evidências recentes mostram que os hormônios do estresse derivados da ativação do Sistema Nervoso Simpático (SNS) e do eixo Hipotálamo-Pituitária-Adrenal (HPA) podem promover danos no DNA e, consequentemente, influenciar a tumorigenicidade de células somáticas. O câncer de boca tem como principais fatores de risco o tabagismo e alcoolismo, entretanto não há estudos que avaliaram os efeitos diretos da exposição aos hormônios do estresse na transformação maligna de queratinócitos humanos derivados da mucosa bucal ou como cofator da carcinogênese química. O objetivo deste estudo será avaliar os efeitos da norepinefrina e do cortisol sobre o dano no DNA e transformação maligna de queratinócitos derivados da mucosa bucal na presença e ausência do carcinógeno específico derivado do tabaco 4 (N-metil-N-nitrosamino) -1- (3-piridil) -butano-1-ona) (NNK). Os queratinócitos serão estimulados com diferentes concentrações de norepinefrina ou cortisol na presença ou ausência de NNK. Células não estimuladas serão usadas como controle. Após 24 horas ou 7 dias de exposição aos hormônios, as células epiteliais serão avaliadas quanto à presença de danos no DNA pelos ensaios cometa e de TUNEL. Os níveis celulares de 8-hidroxi-2-deoxiguanosina (8OHdG) serão mensurados por ELISA e a atividade celular das caspases 3 e 7 será avaliada por imunofluorescência. Ensaios de formação de colônias em ágar serão utilizados para avaliar os efeitos dos hormônios do estresse sobre a transformação maligna dos queratinócitos. A participação dos receptores ²-adrenérgicos tipos 1, 2 e 3, do receptor de glicocorticoide e das vias de sinalização das proteínas kinases PKA e SGK1 no dano ao DNA e transformação maligna dos queratinócitos induzidos pelos hormônios do estresse serão avaliados por experimentos de Western Blotting, ensaios de inibição e ensaios para avaliação do fenótipo maligno. Testes específicos serão utilizados para determinar se há diferenças significativas entre os grupos tratados com os hormônios na presença ou ausência de NNK e inibidores específicos.