Avaliação da transferência gênica de p14Arf e IFN-beta em melanoma primário humano buscando evidências ex vivo de resposta imunológica e eficácia terapêutica in vivo

Resumo

Com este sub-projeto (descrito na proposta principal como Projeto 8), pretendemos realizar ensaios essenciais que comprovam que células de melanoma derivadas de pacientes respondem ao tratamento com vetor adenoviral portador de p14Arf e IFNbeta (interferon-beta). Aqui, exploraremos a indução de morte celular, o mecanismo de morte celular, o potencial para ativação do sistema imune e inibição de progressão tumoral in vivo. Sendo que a resposta imunológica não poderá ser avaliada in vivo, utilizaremos modelos ex vivo para este fim, onde células tumorais serão tratadas com o vetor, expostas para células dendríticas (DC) humanas e estas avaliadas com respeito a presença de marcadores de ativação. Em seguida, células T humanas serão ativadas através de sua co-cultura com as DC. O estado de ativação das células T será avaliado por imunofenotipagem e por ensaios funcionais. Em paralelo, as células primárias de melanoma humano serão implantadas s.c. de camundongos imunodeficientes e, após formação do tumor, tratados com terapia gênica in situ utilizando o adenovírus codificando p14Arf e IFN-beta. Esperamos revelar a redução de progressão tumoral devido à indução de morte celular, porém este modelo não revelará aspectos da resposta imunológica.