Avaliação dos mecanismos moleculares das vias de p53/ARF e IFN-beta envolvidos com a resposta de células de melanoma ao tratamento com os transgenes p19Arf e IFN-beta.

Resumo

O melanoma maligno é uma forma de câncer com alto índice de morte devido, em parte, à sua tendência de formar metástases. Aproximadamente 90% dos casos de melanoma retêm p53 selvagem e talvez isto possa ser utilizado como uma ferramenta para dirigir a expressão do vetor de interesse. O Setor de Vetores Virais (SVV - Incor - FMUSP) tem desenvolvido vetores adenovirais onde expressão dos transgenes é controlada pelo fator de transcrição e supressor de tumor, p53. O SVV também tem aperfeiçoado estes vetores com a modificação na proteína fibra que permite a eficiente transdução de um amplo espectro de células alvos sem a dependência do receptor viral do adenovírus selvagem, CAR. Utilizando estes vetors, o SVV mostrou que o tratamento combinado, mas não individual, com vetores virais codificando p19Arf e IFN-beta induziu morte em células B16, melanoma de camundongo. Assim, propomos novos estudos que têm como alvo a identificação de genes críticos que são ativados pelo tratamento combinado e que agem como mediadores da resposta celular para a estratégia de transferência gênica. Com este projeto, iremos transferir a combinação gênica (p19Arf e IFN-beta) em células B16 e iremos comparar o perfil de expressão gênica dessas células contra células que receberam apenas um ou outro gene. Além disso, iremos realizar ensaios funcionais com o alvo de comprovar o papel dos fatores identificados na resposta ao tratamento com os vetores adenovirais. Além disso, a localização subcelular, modificação pós-traducional e interação de proteínas que são conhecidas como críticas para p53/ARF ou IFN-beta serão avaliadas após tratamento viral. Esperamos que a elucidação dos mecanismos envolvidos na resposta das células de melanoma ao tratamento combinado de p19Arf e IFN-beta possa ser útil para o entendimento da biologia tumoral e, possivelmente, possa direcionar novas intervenções terapêuticas.