Avaliação da interação de proteínas de Leptospira interrogans aos componentes do hospedeiro por meio da construção de Leptospira biflexa recombinante

Resumo

Leptospirose é uma doença infecciosa aguda de importância mundial e considerada como uma das doenças tropicais negligenciadas. A doença é causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira e afeta diversos mamíferos, incluindo o homem. Até o presente momento não existe uma vacina eficaz contra a doença, a qual possui grande importância socioeconômica principalmente nos países tropicais em desenvolvimento. O combate à leptospirose torna-se mais dificultado uma vez que a biologia do patógeno ainda não é totalmente esclarecida. Diversos grupos de pesquisa buscam entender melhor os mecanismos de patogenicidade e desenvolvimento de uma vacina eficaz avaliando potenciais candidatos, que em geral são proteínas de membrana externa conservadas em diferentes espécies de leptospiras patogênicas. Esta caracterização é feita geralmente por meio da expressão e purificação de proteínas recombinantes, que muitas vezes pode não espelhar o que ocorre in vivo. Deste modo, desenvolver linhagens recombinantes tem sido uma alternativa viável. Neste sentido, o presente projeto propõe a construção de linhagens recombinantes de L. biflexa (saprofítica) que expressem as proteínas de interesse, codificadas pelos genes LIC11711 e LIC12587 de L. interrogans, cujas contrapartes recombinantes demonstraram interações significativas com componentes do hospedeiro, in vitro. A expressão das proteínas na cepa saprofítica possibilitará a validação funcional destas como possíveis ligantes a componentes do hospedeiro e o entendimento dos papeis nos mecanismos de patogenicidade e possíveis candidatos vacinais. Inicialmente serão feitas construções utilizando o plasmídeo pMaOri e os genes de interesse, previamente fusionados com o promotor do gene lipL32. A L. biflexa será transformada com as construções plasmidiais para a expressão das proteínas. Serão realizados ensaios de localização celular e ensaios de interação da L. biflexa recombinante com os componentes do hospedeiro. Hamsters serão imunizados com as proteínas recombinantes ou as bactérias recombinantes e desafiados para avaliação da proteção imune fornecida por estas elaborações vacinais.