Avaliação do eixo ATP-adenosina em linfócitos na infecção por SARS-CoV-2

Resumo

Adenosina trifosfato (ATP) é uma molécula predominantemente intracelular que pode ser liberada para o meio extracelular durante ativação, estresse tecidual ou dano celular. O ATP extracelular pode ser rapidamente convertido em ADP, AMP e adenosina por ação de ectonucleotidases, como CD39 e CD73 que estão presentes na membrana de algumas células. A adenosina, por sua vez, pode induzir respostas anti-inflamatórias pela indução de AMP cíclico (cAMP). Alterações no metabolismo e sinalização purinérgica já foram observadas em casos de infecção viral com imunoativação crônica, como o HIV, e nossos dados preliminares sugerem que um cenário semelhante poderia estar ocorrendo na infecção pelo novo coronavírus que causa a COVID-19. Essa infecção pode levar a uma elevada produção de citocinas pró-inflamatórias, fenômeno conhecido como cytokine storm. Analisando a expressão de CD39 e CD73 em leucócitos de pacientes com COVID-19, de forma clinica moderada e grave, dos Ambulatórios do Hospital das Clinicas de São Paulo, observamos uma redução na frequência de neutrófilos e linfócitos T CD8+ que expressam CD73. Além disto, detectamos uma redução percentual de células CD19+CD39+CD73+ no sangue periférico de pacientes com forma severa de COVID-19, sugerindo que o metabolismo de ATP extracelular em células B pode estar alterado na doença. Dessa forma, nós acreditamos que a menor frequência de células CD19+CD39+CD73+ pode estar associada ao perfil pró-inflamatório observado em pacientes com COVID-19. Para testar nossa hipótese, linfócitos B CD19+ serão isolados de pacientes com COVID-19 e controles saudáveis e o metabolismo de ATP em adenosina será avaliado por cromatografia líquida de alta performance (HPLC). O papel imunomodulador da adenosina será verificado in vitro em culturas de células B isoladas e células mononucleares. Também será avaliado o papel imunomodulador de células B de pacientes com COVID-19 na ativação e proliferação de linfócitos T autólogos. Por fim, verificaremos ainda a expressão de outras ectonucleotidases e dos receptores de adenosina em amostras de pacientes com COVID-19 além das concentrações séricas de adenosina. Esses resultados poderão auxiliar na compreensão dos mecanismos envolvidos na patogênese da COVID-19 além de indicar possíveis estratégias para intervenções terapêuticas. (AU)