Quantificação de anticorpos em colunas de afinidade com proteínas A e G: Avaliação dos efeitos da viscosidade no desempenho dos métodos analíticos

Resumo

Os anticorpos são biomoléculas fundamentais em pesquisas e estudos, diagnósticos clínicos, devido à sua capacidade em reconhecer e ligar a moléculas presentes em uma mistura complexa. Para a obtenção dessas moléculas é a etapa de purificação dos anticorpos, dentre elas destaca-se a técnica não cromatográfica, precipitação, na qual é baseada no princípio de redução da solubilidade de um soluto em um solvente, influenciado pela adição de algum agente precipitante. Dentre os agentes precipitantes, ressalta-se o polietilenoglicol (PEG), que tem como uma das consequências do seu uso o aumento da viscosidade do meio, o que pode acabar dificultando etapas posteriores de separação. Deste modo, este projeto tem como finalidade o desenvolvimento, a otimização e validação dos métodos analíticos em HPLC após a precipitação de anticorpos com polietilenoglicol analisando os efeitos da viscosidade, também conhecido como "viscous fingering". Para tal, serão utilizados anticorpos monoclonais (mAbs) e policlonais (pAbs) empregando as colunas analíticas POROS A e POROS G. Para cada coluna serão avaliados os parâmetros de robustez, especificidade, precisão, linearidade, acurácia e os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ).