| Texto completo | |
| Autor(es): |
Lima, Juliana M.
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Seidl, Claudia
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Cunha, Elise M. F.
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Oliveira, Arthur H. C.
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Cardoso, Carmen L.
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Número total de Autores: 5
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| Afiliação do(s) autor(es): | [1] Univ Sao Paulo, Dept Quim, Grp Cromatog Bioafinidade & Prod Nat, Fac Filosofia Ciencias & Letras Ribeirao Preto, BR-14040900 Ribeirao Preto, SP - Brazil
[2] Inst Fed Educ Ciencia & Tecnol Rondonia, Campus Ji Parana, BR-76900000 Ji Parana, RO - Brazil
Número total de Afiliações: 2
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | Journal of the Brazilian Chemical Society; v. 30, n. 11, SI, p. 2308-2317, NOV 2019. |
| Citações Web of Science: | 0 |
| Resumo | |
We describe an on-flow zonal affinity-based chromatography assay to screen ligands for the nucleoside diphosphate kinase B enzyme (NME2) from Homo sapiens. For the first time, we have covalently immobilized NME2 on the surface of an open fused silica capillary reactor (NME2-ICER) and placed the reactor before the analytical column, which resulted in a two-dimensional liquid chromatography-based system. We evaluated the pH effect on immobilized NME2 activity and carried out steady-state kinetic studies to compare free and immobilized NME2. Steady-state kinetic studies with the substrates adenosine 5'-triphosphate di(tris) salt dihydrate (ATP) and guanosine 5'-diphosphate sodium salt (GDP) resulted in apparent Michaelis-Menten constant values of 1136 and 713 mmol L-1, respectively. The ping-pong catalysis mechanism and substrate specificity were preserved after NME2 immobilization. By employing a reference inhibitor, (-)-epicatechin gallate (ECG), we verified the potential application of this method in NME2 ligand screening and NME2 inhibitor identification. The half maximum inhibitory concentration (IC50) for ECG was 161.3 +/- 1.0 mu mol L-1. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 14/50249-8 - Green chemistry: sustainable synthetic methods employing benign solvents, safer reagents, and bio-renewable feedstock |
| Beneficiário: | Arlene Gonçalves Corrêa |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa Centros de Pesquisa em Engenharia |
| Processo FAPESP: | 13/01710-1 - Ligantes enzimáticos: novos modelos de triagem |
| Beneficiário: | Quezia Bezerra Cass |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Temático |
| Processo FAPESP: | 14/06907-0 - Imobilização da enzima nucleosídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania major: do estudo de condições à aplicação na triagem de ligantes |
| Beneficiário: | Juliana Maria de Lima |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado Direto |
| Processo FAPESP: | 14/11640-3 - Métodos LC-MS/2D para triagem de ligantes para a avaliação de atividade inibitória de enzimas e identificação dos compostos ativos em extratos brutos |
| Beneficiário: | Cláudia Seidl |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |