Expression of fibroblastic and osteoblastic phenotypes in three-dimensional cultures in the presence or not of bioactive glass particles

• Grant number: 09/15525-6
• Support Opportunities: Regular Research Grants
• Start date: February 01, 2010
• End date: July 31, 2012
• Field of knowledge: Health Sciences - Dentistry - Periodontology
• Principal Investigator: Daniela Bazan Palioto Bulle
• Grantee: Daniela Bazan Palioto Bulle
• Host Institution: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brazil
• City of the host institution: Ribeirão Preto

Abstract

A busca por novas terapias com o intuito de restaurar a integridade estrutural do periodonto destruído pela doença periodontal tem ganhado novas perspectivas com os avanços das pesquisas na área de engenharia tecidual, que se baseiam na terapia celular envolvendo culturas de células e tecidos, associadas ou não a biomateriais. Contudo, tais culturas são normalmente feitas sobre superfícies bidimensionais, diferentes da estrutura tridimensional em que as células vivem no organismo. O presente projeto tem como objetivo analisar a expressão dos fenótipos fibroblástico e osteoblástico em culturas tridimensionais na presença ou não de partículas de vidro bioativo, por meio de métodos de biologia celular e molecular. Células derivadas do ligamento periodontal humano e células osteoblásticas de calvária de rato serão plaqueadas em arcabouços bidimensionais (Thermanox - controle 1; Thermanox revestido por colágeno tipo I - controle 2; Thermanox revestido por colágeno tipo I e acrescido de vidro bioativo - controle 3) e tridimensionais (Gel de colágeno tipo I; Gel de colágeno tipo I acrescido de vidro bioativo). Serão avaliados: viabilidade celular (MTT), proliferação celular (BrdU), análise histológica, expressão quantitativa dos genes Periostina (PRT), Periodontal Ligament Specific 17 (PDLs17), Calcium-Binding Protein (S100A4) e Fibromodulina (FBM), marcadores do fenótipo fibroblástico, e Fosfatase Alcalina (ALP), Osteopontina (OPN), Sialoproteína Óssea (BSP), Osteocalcina (OC), Colágeno I (COL I) e Runx2, marcadores osteoblásticos, por PCR em tempo real, atividade de ALP normalizada pela proteína total, localização de proteínas da matriz não-colágena (ALP, OPN e BSP) por imunofluorescência indireta e mineralização (vermelho de Alizarina). A análise estatística será realizada por meio de teste paramétrico ou não-paramétrico, a depender da normalidade dos dados, para dados independentes e mais de duas amostras. (AU)