Cellular localization of MDJ1 chaperone from Paracoccidioides brasiliensis: comparison between isolates and related fungal species under stress growth conditions

• Grant number: 09/06618-0
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Master
• Start date: September 01, 2009
• End date: April 30, 2010
• Field of knowledge: Biological Sciences - Microbiology - Biology and Physiology of Microorganisms
• Principal Investigator: Rosana Puccia
• Grantee: Ítala Bruna Zábulon Dourado
• Host Institution: Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia. Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brazil
• Associated research grant: 06/05095-6 - Analysis of exported vesicular structures and of secreted molecules by the pathogenic fungi Paracoccidioides brasiliensis e Cryptococcus neoformans, AP.TEM

Abstract

Paracoccidioides brasiliensis é um dimórfico térmico, cuja capacidade de transição de conídeos inalados para leveduras é fundamental para o desenvolvimento da paracoccidioidomicose. Portanto, moléculas preferencialmente expressas na levedura, notadamente na superfície, podem ter alguma participação na relação parasita-hospedeiro, virulência e são potenciais alvos farmacológicos. Nosso grupo caracterizou o gene PbMDJ1, codificador da chaperone Mdj1. Ela é um membro mitocondrial da família DnaJ, cuja função é regular a atividade da Hsp70 cognata; DnaJ de bactéria apresenta também atividade de tiol-dissulfito oxidoredutase. Mostramos por microscopia eletrônica e confocal que anticorpos policlonais de coelho anti-PbMdj1 recombinante localizaram a PbMdj1 tanto na mitocôndria de leveduras de P. brasiliensis Pb18, como abundantemente na parede celular e região de brotamento. Os anticorpos revelaram uma proteína 55 kDa em extratos mitocondriais, com significativo aumento da expressão em condições de estresse térmico, e em uma fração extraída de parede celular. Em Pb18, o acúmulo de transcritos PbMDJ1 foi preferencial na fase leveduriforme. Foi o primeiro relato de uma DnaJ na superfície celular e sua função na parede celular é especulativa. O presente projeto visa responder se a localização extramitocondrial da Mdj1 na parede celular ocorre em outras fases do fungo, outros isolados ou em fungos relacionados e se é afetada por estímulos de estresse como choque térmico e oxidativo. Desta forma, será realizada a avaliação microscópica e eletroforética da Mdj1 em células leveduriformes, micelianas e em transição de fases dos isolados fúngicos selecionados. A análise será ampliada para fungos crescendo em condições de estresse. Estes objetivos estão contidos no projeto temático FAPESP 06/05095-6 e irão contribuir para o entendimento da estrutura da parede celular de P. brasiliensis e do papel da Mdj1 nesse compartimento. (AU)