Heterologous expression and purification of CaneCPI-5

• Grant number: 21/09164-2
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
• Start date: September 01, 2021
• End date: August 31, 2023
• Field of knowledge: Biological Sciences - Genetics - Molecular Genetics and Genetics of Microorganisms
• Principal Investigator: Flavio Henrique da Silva
• Grantee: Luiz Felipe Botão Tavolaro
• Host Institution: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brazil
• Associated research grant: 19/26070-1 - Modulation of acquired enamel pellicle to control dental mineral loss: unravelling mechanisms to make therapies possible, AP.TEM

Abstract

A atividade do bolsista será concentrada na expressão heteróloga e purificação da CaneCPI-5. Para a expressão, será utilizada a cepa bacteriana E. coli Rosetta (DE3), transformada com o plasmídeo pET28aCaneCPI-5. A proteína expressa será purificada da fração solúvel de culturas bacterianas induzidas por IPTG (Isopropil-beta-D-Thiogalactosidio), submetidas a centrifugação e sonicação. A purificação será feita por cromatografia de afinidade, utilizando colunas contendo resina de níquel Ni-NTA Superflow (Qiagen), conforme descrito previamente. Para dar suporte ao projeto e otimizar a produção da CaneCPI-5, serão testados meios de cultura mais baratos (meio autoindutivo com lactose e contendo soro de leite), assim como expressão na levedura Pichia pastoris, otimizando códons para expressão nesse sistema. A expressão e purificação serão realizadas continuamente ao longo do projeto, de forma a suprir a alta demanda, uma vez que a proteína será utilizada nos 14 subprojetos que constituem o temático. Além dessas atividades, o bolsista deverá auxiliar o coordenador do grupo (Prof. Flavio Henrique Silva) na organização do laboratório, compras e atendimento de demandas de estudantes. (AU)