Analysis and acquisition of confocal microscopy images to evaluate the effects of meiotic blockage on oocyte epigenetic maturation and intrafollicular communication

• Grant number: 24/03347-6
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Technical Training Program - Technical Training
• Start date: April 01, 2024
• End date: March 31, 2026
• Field of knowledge: Agronomical Sciences - Veterinary Medicine - Animal Reproduction
• Principal Investigator: Lawrence Charles Smith
• Grantee: Helena Fabiana Reis de Almeida Saraiva
• Host Institution: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brazil
• Associated research grant: 21/09886-8 - EPIGENETIC MATURATION OF THE OOCYTE AND TOTIPOTENCE - THE POTENTIAL OF THE OOCYTE AND ITS RELATIONSHIP WITH THE OVARIAN FOLLICULAR NICHE, AP.SPEC

Abstract

A avaliação visual acurada de alterações epigenéticas e estruturais que ocorrem no oócito durante o processo de maturação in vitro requer o emprego de técnicas refinadas de microscopia, como por exemplo a microscopia confocal. Neste plano de atividades, a proposta é desenvolver e implementar técnicas avançadas de microscopia confocal que atendam às demandas científicas da Parte II do Projeto SPEC. Esse segmento do projeto avalia as alterações epigenéticas que ocorrem no gameta feminino quando da adoção de protocolos de bloqueio meiótico, e também seus efeitos sobre a comunicação no complexo cumulus-oócito via alterações estruturais em projeções transzonais. Propomos desenvolver metodologias utilizando o microscópio confocal MICA (EMU 2022/15066-0), com avaliação de amostras fixadas ou in vivo (live cell imaging), com um sistema de atmosfera controlada que permite a aquisição sequencial de imagens durante o cultivo in vitro (sistema time-lapse). Tais ferramentas e estratégias serão empregadas no estudo de alterações celulares que ocorrem durante a maturação oocitária (incluindo a progressão meiótica oocitária e a comunicação cumulus-oocitária) ou durante as primeiras clivagens embrionárias. Além disso, o equipamento EMU permitirá empregar a microscopia confocal em variados tipos de amostras e análises, atendendo às necessidades de outros projetos.