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Effect of Titanium Tetrafluoride on viability and morphology of NIH3T3 fibroblasts

Grant number: 09/17360-4
Support Opportunities:Scholarships in Brazil - Scientific Initiation
Start date: February 01, 2010
End date: January 31, 2012
Field of knowledge:Health Sciences - Dentistry
Principal Investigator:Ana Carolina Magalhães
Grantee:Luana Polioni Al-Ahj
Host Institution: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brazil

Abstract

De acordo com estudos, o fluoreto de titânio (TiF4) tem se mostrado mais eficaz em minimizar a erosão de esmalte e dentina em protocolos in vitro e in situ em comparação aos outros sais fluoretados. No entanto, para que este agente possa ser testado clinicamente com segurança, seria importante obter dados em relação a sua biocompatibilidade e a possíveis efeitos citotóxicos. Devido à falta de dados e à importância de estudos sobre citotoxicidade de agentes fluoretados potencialmente comercializáveis anteriormente ao seu uso clínico, o objetivo deste projeto será testar o efeito do TiF4 adicionado ao meio de cultura, em diferentes concentrações e em pH acidulado (pH 1,2) e tamponado (pH 6,8), na viabilidade e morfologia de fibroblastos NIH3T3 em comparação ao fluoreto de sódio (NaF, controle positivo) e ao meio de cultura convencional (sem agente fluoretado, controle negativo). Para tal, fibroblastos da linhagem NIH3T3 serão cultivados em meio de Eagle. As células serão mantidas durante 48h, sendo que o meio será trocado se houver mudança de cor durante este período, a 37ºC e à atmosfera de CO2 5%. Na seqüência, as células serão divididas em 9 grupos de acordo com as seguintes condições do meio de cultura: a) controle: meio de cultura (pH 6,8); b) meio de cultura com NaF 5,42% (2,45% F, pH 4,5); c) meio de cultura com NaF 5,42% tamponado (2,45% F, pH 6,8); d) meio de cultura com NaF 2,71% tamponado (1,225% F, pH 6,8); e) meio de cultura com NaF 1,355% tamponado (0,6125% F, pH 6,8); f) meio de cultura com TiF4 4% (2,45% F, pH 1,2); g) meio de cultura com TiF4 4% tamponado (2,45% F, pH 6,8); h) meio de cultura com TiF4 2% tamponado (1,225% F, pH 6,8); e i) meio de cultura com TiF4 1% tamponado (0,6125% F, pH 6,8). Os ensaios de citotoxicidade levarão em conta a viabilidade celular que será analisada pela redução do MTT, baseando-se na capacidade que a enzima succinato desidrogenase (presente nas mitocôndrias de células viáveis) tem de converter o sal de tetrazolium que é hidrossolúvel e de cor amarelada, em cristais de formazana que são de cor azul escura, indicando a atividade mitocondrial e conseqüente viabilidade celular. Outro método utilizado será a captação do vermelho neutro, que se baseia na aplicação de um corante que se concentra nos lisossomos. Em função da capacidade que os lisossomos possuem de absorver o corante, este teste indicará a distinção entre células viáveis, danificadas ou mortas. A avaliação da morfologia será realizada pela microscopia de luz, devendo ser descrita a morfologia geral das células, integridade da membrana, descolamento e lise celular. Os dados serão tabulados e submetidos à análise estatística (p<0,05).

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Scientific publications
(The scientific publications listed on this page originate from the Web of Science or SciELO databases. Their authors have cited FAPESP grant or fellowship project numbers awarded to Principal Investigators or Fellowship Recipients, whether or not they are among the authors. This information is collected automatically and retrieved directly from those bibliometric databases.)
ARANDA SALOMAO, PRISCILA MARIA; DE OLIVEIRA, FLAVIA AMADEU; RODRIGUES, PAULA DANIELLE; AL-AHJ, LUANA POLIONI; DA SILVA GASQUE, KELLEN CRISTINA; JEGGLE, PIA; RABELO BUZALAF, MARILIA AFONSO; DE OLIVEIRA, RODRIGO CARDOSO; EDWARDSON, JOHN MICHAEL; MAGALHAES, ANA CAROLINA. The cytotoxic effect of TiF4 and NaF on fibroblasts is influenced by the experimental model, fluoride concentration and exposure time. PLoS One, v. 12, n. 6, . (13/20372-0, 14/16415-8, 09/17360-4, 15/05009-1, 10/14984-4, 13/13484-6)
KELLEN CRISTINA DA SILVA GASQUE; LUANA POLIONI AL-AHJ; RODRIGO CARDOSO OLIVEIRA; ANA CAROLINA MAGALHÃES. Cell density and solvent are critical parameters affecting formazan evaluation in MTT assay. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 57, n. 3, p. 381-385, . (10/14984-4, 09/17360-4)