Avaliação da localização nuclear e interação das glutaminases com receptores nucleares

Resumo

Os processos celulares são largamente mediados pela interação entre proteínas, levando à modificações diversas nas mesmas e consequente alteração de suas vias de ação. Mais, interações da mesma proteína com diferentes parceiros podem levar à respostas de natureza distinta na célula, muitas vezes envolvendo processos antes não previstos para a mesma. Duas isoenzimas da glutaminase foram identificadas em mamíferos, a KGA (Kidney-type Glutaminase) e LGA (Liver-type Glutaminase). As mesmas possuem outros domínios distintos, além do catalítico, onde pode-se encontrar sequências tipicamente presentes em co-ativadores de reguladores transcricionais do tipo receptores nucleares, e ankirin repeats, envolvidos em contatos proteína-proteína. A glutaminase é responsável pelo primeiro passo no metabolismo da glutamina, catalisando a de-aminação oxidativa deste aminoácido com consequente conversão em glutamato. Em neoplasmas, níveis elevados de metabolismo da glutamina na mitocôndria estão associados às altas demandas por energia e blocos biosintéticos, importantes para o fenótipo proliferativo. Estudos recentes têm mostrado que sua inibição ou knock down é suficiente para restringir o crescimento tumoral. Apesar da clara correlação entre a oxidação da glutamina e as demandas biosintéticas/energéticas das células tumorias, seu padrão complexo de localização celular e estrutura de multidomínios levantam a possibilidade de que as glutaminases contribuam para o processo canceroso por vias diversas. O objetivo deste projeto é o de investigar as regiões destas isoenzimas importantes para sua localização nuclear e, mais, se as mesmas interagem e interferem com a atividade transcricional de receptores nucleares. No outro sentido vamos também investigar, in vitro, se a interação com receptores nucleares interfere com a atividade de glutaminase. Por fim, avaliaremos, dentro do tempo disponível, se a quebra destas interações afetam o fenótipo proliferativo e metabólico (produção de lactato, ATP e consumo de oxigênio) de diferentes linhagens tumorais.