Investigação de novos alvos e moléculas antifúngicas sobre Candida spp. e Cryptococcus spp.

Resumo

As infecções fúngicas invasivas (IFIs) representam um sério risco a saúde resultando em elevadas taxas de mortalidade e morbidade. Dentre as IFIs, infecções causadas por Candida albicans representa 50-70% dos casos, seguidos por Cryptococcus, Aspergillus e Pneumocystis. Entretanto, espécies resistentes e emergentes têm sido frequentemente isoladas, como por exemplo Candida auris considerado um superfungo. Além da resistência aos agentes antifúngicos, outras limitações como elevada toxicidade, farmacocinética desfavorável, alto custo e indisponibilidade, reduzem ainda mais as opções terapêuticas das infecções fúngicas. Assim, novas moléculas antifúngicas estão sendo pesquisadas nos últimos anos, abordando novas classes químicas e novos alvos de ação. Portanto, este projeto tem como objetivo investigar novos alvos fúngicos, como as enzimas dihidrofolato redutase de C. auris (CaDHFR) e urease de Cryptococus neoformans (CnURE), e avaliar a atividade antifúngica in vitro e in vivo dos inibidores da CaDHFR e CnURE e de moléculas sintéticas sobre Candida spp. e Cryptococcus spp. As estratégias para este estudo serão: i) clonar, expressar e purificar as enzimas CaDHFR e CnURE; ii) cristalizar e resolver as estruturas de CaDHFR e CnURE; iii) avaliar o efeito inibitório e a interação molecular dos inibidores com as enzimas CaDHFR e CnURE; iv) triar uma biblioteca de compostos sintéticos; v) selecionar moléculas com potencial antifúngico; vi) avaliar o efeito fungicida e antibiofilme; vii) avaliar a combinação com antifúngicos convencionais; viii) prospectar o possível alvo molecular dos compostos usando uma biblioteca de mutantes de Saccharomyces cerevisiae; ix) avaliar os efeitos morfofisiológicos dos compostos; x) avaliar toxicidade dos compostos em linhagens celulares e modelo larvário de Galleria mellonella; e por fim, xi) avaliar o efeito antifúngico in vivo dos compostos usando G. mellonella e murinos infectados por Candida spp. ou Cryptococcus spp. (AU)