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Emprego de selante de fibrina combinado com células tronco mesenquimais para o reparo de lesão no funículo anterior: efeitos sobre a inflamação, neuroproteção e regeneração axonal

Processo: 12/22750-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2013
Vigência (Término): 31 de agosto de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Pesquisador responsável:Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira
Beneficiário:Aline Barroso Spejo
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):16/19954-2 - Regeneração de aferências primárias direcionadas a motoneurônios medulares por meio de terapia gênica com neurotrofina-3, BE.EP.DR
Assunto(s):Fármacos neuroprotetores   Neuroproteção   Células-tronco mesenquimais   Plasticidade neuronal   Neurociências   Inflamação   Regeneração nervosa

Resumo

A limitada capacidade regenerativa dos neurônios no sistema nervoso central e a formação de um ambiente inibitório no local da injúria representam o principal desafio para regeneração e reparo de injúrias à medula espinal. Neste sentido, a influência das células tronco mesenquimais (CTM) no microambiente medular, formação da cicatriz glial e seus efeitos sobre a inflamação, controle da gliose reativa, sobrevivência neuronal e plasticidade sináptica em motoneurônios lesionados, torna-se um importante objeto de estudo. Adicionalmente, o emprego do selante de fibrina, como substrato para as CTM, pode contribuit positivamente para o sucesso regenerativo no SNC. CTM modificam o ambiente inflamatório na fase aguda e reduzem efeitos da cicatriz glial inibitória na fase subaguda e crônica, promovendo um ambiente permissivo à extensão axonal. Pode ainda, prover fatores de crescimento que promovem sobrevivência e elongação axonal através das lesões à medula espinal. Para avaliar o poder neuroprotetor, neuroregenerativo e modulatório da inflamação e cicatriz glial do tratamento com selante de fibrina e/ou terapia com CTM após uma lesão central, será realizada uma lesão perfurante na região do funículo anterior direito, nos níveis medulares L4 e L5 (n=5, por grupo experimental). Após sobrevida de 7 dias após a lesão será realizado (1) RT-PCR em tempo real para VEGF, IL4, IL3, TNF±, IL6, arginase-1, iNOS, e TGF² e (2) imunohistoquímica com dupla marcação para IBA1 (marcador de microglia e macrófagos) e Arginase-1 (marcador de macrófago M2) para demonstração in situ da presença/reatividade de tais células. Após sobrevida de 14 dias serão realizadas (1) contagem neuronal por coloração de Nissl e (2) imunohistoquímica para sinaptofisina (marcador de sinapses). Com sobrevida de 8 semanas, serão realizados (1) teste comportamental para a análise da marcha dos animais (Catwalk), (2) análise da cicatriz glial por FISH (hibridação in situ fluorescente) e IH. Neste procedimento serão duplamente marcados GFAP (marcador de astrócitos - IH) e Condroitin-sulfato (FISH), (3) análise da regeneração neuronal através da cicatriz glial por FISH e IH. Neste procedimento serão duplamente marcados neurofilamentos (IH) e GAP-43 (marcador de neurônio em regeneração - FISH) e (4) análise qualitativa da produção de colágeno e laminina por CTM através de IH.

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SPEJO, ALINE BARROSO; TELES, CAROLINE BRANDAO; ZUCCOLI, GIULIANA DA SILVA; RODRIGUES DE OLIVEIRA, ALEXANDRE LEITE. Synapse preservation and decreased glial reactions following ventral root crush (VRC) and treatment with 4-hydroxy-tempo (TEMPOL). Journal of Neuroscience Research, v. 97, n. 4, p. 520-534, APR 2019. Citações Web of Science: 0.
SPEJO, A. B.; CHIAROTTO, G. B.; FERREIRA, A. D. F.; GOMES, D. A.; FERREIRA JR, R. S.; BARRAVIERA, B.; OLIVEIRA, A. L. R. Neuroprotection and immunomodulation following intraspinal axotomy of motoneurons by treatment with adult mesenchymal stem cells. JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, v. 15, AUG 14 2018. Citações Web of Science: 5.
BISCOLA, NATALIA PERUSSI; CARTAROZZI, LUCIANA POLITTI; ULIAN-BENITEZ, SUZANA; BARBIZAN, ROBERTA; CASTRO, MATEUS VIDIGAL; SPEJO, ALINE BARROSO; FERREIRA, JR., RUI SEABRA; BARRAVIERA, BENEDITO; RODRIGUES OLIVEIRA, ALEXANDRE LEITE. Multiple uses of fibrin sealant for nervous system treatment following injury and disease. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 23, n. 1 MAR 14 2017. Citações Web of Science: 18.
NATALIA PERUSSI BISCOLA; LUCIANA POLITTI CARTAROZZI; SUZANA ULIAN-BENITEZ; ROBERTA BARBIZAN; MATEUS VIDIGAL CASTRO; ALINE BARROSO SPEJO; RUI SEABRA FERREIRA JR.; BENEDITO BARRAVIERA; ALEXANDRE LEITE RODRIGUES OLIVEIRA. Multiple uses of fibrin sealant for nervous system treatment following injury and disease. Journal of Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, v. 23, p. -, 2017.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

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