Emprego de selante de fibrina combinado com células tronco mesenquimais para o reparo de lesão no funículo anterior: efeitos sobre a inflamação, neuroproteção e regeneração axonal.

Resumo

A limitada capacidade regenerativa dos neurônios no sistema nervoso central e a formação de um ambiente inibitório no local da injúria representam o principal desafio para regeneração e reparo de injúrias à medula espinal. Neste sentido, a influência das células tronco mesenquimais (CTM) no microambiente medular, formação da cicatriz glial e seus efeitos sobre a inflamação, controle da gliose reativa, sobrevivência neuronal e plasticidade sináptica em motoneurônios lesionados, torna-se um importante objeto de estudo. Adicionalmente, o emprego do selante de fibrina, como substrato para as CTM, pode contribuit positivamente para o sucesso regenerativo no SNC. CTM modificam o ambiente inflamatório na fase aguda e reduzem efeitos da cicatriz glial inibitória na fase subaguda e crônica, promovendo um ambiente permissivo à extensão axonal. Pode ainda, prover fatores de crescimento que promovem sobrevivência e elongação axonal através das lesões à medula espinal. Para avaliar o poder neuroprotetor, neuroregenerativo e modulatório da inflamação e cicatriz glial do tratamento com selante de fibrina e/ou terapia com CTM após uma lesão central, será realizada uma lesão perfurante na região do funículo anterior direito, nos níveis medulares L4 e L5 (n=5, por grupo experimental). Após sobrevida de 7 dias após a lesão será realizado (1) RT-PCR em tempo real para VEGF, IL4, IL3, TNF±, IL6, arginase-1, iNOS, e TGF² e (2) imunohistoquímica com dupla marcação para IBA1 (marcador de microglia e macrófagos) e Arginase-1 (marcador de macrófago M2) para demonstração in situ da presença/reatividade de tais células. Após sobrevida de 14 dias serão realizadas (1) contagem neuronal por coloração de Nissl e (2) imunohistoquímica para sinaptofisina (marcador de sinapses). Com sobrevida de 8 semanas, serão realizados (1) teste comportamental para a análise da marcha dos animais (Catwalk), (2) análise da cicatriz glial por FISH (hibridação in situ fluorescente) e IH. Neste procedimento serão duplamente marcados GFAP (marcador de astrócitos - IH) e Condroitin-sulfato (FISH), (3) análise da regeneração neuronal através da cicatriz glial por FISH e IH. Neste procedimento serão duplamente marcados neurofilamentos (IH) e GAP-43 (marcador de neurônio em regeneração - FISH) e (4) análise qualitativa da produção de colágeno e laminina por CTM através de IH.