Caracterização cinética e busca de inibidores de Ohr (organic hydroperoxide Resistence Protein)de Xylella fastidiosa

Resumo

Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) podem ser geradas de forma exacerbada por plantas, em resposta a invasão de um patógeno, na tentativa de eliminá-lo. Em contrapartida, no decorrer da evolução, seres patogênicos desenvolveram formas de defesa contra esse estresse oxidativo. Dentre essas formas protetoras podemos destacar a proteína Ohr (Organic Hydroperoxide Resistance Protein), uma peroxidase, dependente de tiól, que possui uma cisteína reativa que atua preferencialmente sobre peróxidos orgânicos e pelo menos até o momento, somente encontrada em procariotos. Por estar presente somente em bactérias e por apresentar características estruturais e funcionais únicas, Ohr é um alvo em potencial para a criação de drogas bactericidas. Xylella fastidiosa é um bom exemplo de organismo alvo para esse tipo de tratamento. Esta bactéria pode habitar o xilema de cítricos em geral, sendo responsável pelo desenvolvimento da CVC (Clorose Variegada dos Citros), uma doença que afeta a planta como um todo e acarreta em grandes perdas na produção. Analisando este contexto, este projeto tem como objetivos realizar a caracterização cinética da enzima Ohr de X. fastidiosa, na busca por substratos preferenciais e inibidores desta enzima. Em relação à caracterização cinética, estamos analisando a atividade enzimática de Ohr frente a diferentes peróxidos derivados de lipídeos sintetizados fotoquimicamente pelo grupo dos Dr. Paolo di Mascio e Dra. Sayuri Miyamoto (IQ-USP). A busca por possíveis inibidores será realizada utilizando-se modelos de virtual screening tendo como base bancos de substâncias químicas e extratos provenientes de grupos da rede BIOprospecTA . Em uma segunda fase, pretendemos realizar testes de sobrevivência bacteriana sob estresse oxidativo, na presença destes possíveis inibidores da atividade de Ohr. (AU)