Ativação celular induzida por ArtinM: interferência da estrutura quaternária das diferentes formas recombinantes sobre funções de neutrófilos e interação com receptores glicosilados da superfície dessas células.

Resumo

A lectina ArtinM, também conhecida como KM+ e artocarpina, é uma lectina ligante de D-manose obtida do extrato salino de sementes de Artocarpus integrifolia. Ela ativa neutrófilos e induz sua migração, tanto in vitro com in vivo (Santos-De-Oliveira, Dias-Baruffi et al., 1994). Já foi demonstrado que essa atividade relaciona-se com a propriedade de ArtinM de acelerar a regeneração de tecidos, como o epitélio córneo (Chahud, Ramalho et al., 2009). No entanto, a potencial aplicabilidade farmacêutica da lectina nativa estaria bastante comprometida se dependesse do uso da lectina purificada a partir do extrato de sementes, já que esse procedimento é caro, laborioso e proporciona baixo rendimento. Assim, a utilização de lectina recombinante é imprescindível para a viabilidade de qualquer projeto de uso de ArtinM em escala superior à exigida por um laboratório de investigação. Por outro lado, o uso de formas recombinantes de ArtinM, como as já obtidas por nosso grupo, exigem um trabalho extenso de caracterização biológica dessas moléculas. O presente projeto tem como objetivo estudar as atividades exercidas por diferentes formas de ArtinM recombinante, sobre neutrófilos, determinando, adicionalmente, os mecanismos envolvidos nessas atividades. A molécula de ArtinM, que não é glicosilada, constitui-se de cadeias protéicas de 16 kDa que se organizam como homotetrâmeros. Cada cadeia contém um domínio de reconhecimento de carboidrato (CRD) (Rosa, De Oliveira et al., 1999). Essa organização permite que a molécula estabeleça ligações concomitantes com receptores glicosilados da superfície celular, como CXCR2 (Pereira-Da-Silva, Moreno et al., 2006) e TLR2 (Coltri, Oliveira et al., 2008), e com componentes glicosilados da matriz extracelular, como laminina (Ganiko, Martins et al., 2005), viabilizando o movimento haptotático da célula (Ganiko, Martins et al., 1998). A ativação de neutrófilos induzida por ArtinM resulta em liberação de mediadores inflamatórios (LTB4, IL-8) e aumento das atividades efetoras do neutrófilo (fagocitose e morte de bactérias) (Toledo, Scwartz et al., 2009). A oligomerização da molécula recombinante, de acordo com resultados preliminares obtidos em nosso laboratório, pode variar de acordo com o sistema de expressão utilizado e é exigida para que a proteína recombinante reproduza algumas das atividades desempenhadas pela molécula nativa (tetramérica). Por essa razão, o presente projeto inclui a avaliação da interferência da estrutura quaternária das diferentes formas recombinantes de ArtinM sobre as atividades exercidas sobre neutrófilos. O projeto inclui ainda o refinamento da análise de especificidade das diferentes formas de ArtinM por estruturas variadas de glicanas, pela técnica de glycoarray. Esse refinamento ajudará a elucidar quais os possíveis açúcares contidos nos receptores glicosilados encontrados na superfície de neutrófilos podem ser reconhecidos por ArtinM. Os dados gerados contribuirão para o estudo de possíveis interações estabelecidas pelas diferentes formas de ArtinM com receptores do tipo Toll, para a dissecção das interações estabelecidas por ArtinM com receptores glicosilados da superfície de neutrófilos humanos e para elucidar os mecanismos pelos quais ArtinM desencadeia respostas funcionais por parte dessas células.Em decorrência, o papel indutor da ativação de neutrófilos exercida por ArtinM será melhor compreendido e novas perspectivas de potenciais aplicabilidades farmacêuticas dessa lectina serão abertas.