Consequencias in vivo da inibicao farmacologica da enzima acido graxo sintase sobre proteinas do ciclo celular em melanoma murino derivado de linhagem b16-f10.

Resumo

Ácido graxo sintase (FASN - fatty acid synthase, EC 2.3.1.85) é a enzima metabólica responsável pela síntese endógena do ácido graxo saturado palmitato, a partir dos precursores acetil-CoA e malonil-CoA. Diversos estudos mostram que, em contraste com a maioria das células normais, FASN é altamente expressa em vários tipos de neoplasias malignas humanas, tais como as de próstata, mama e melanoma sendo que, em alguns destes tumores, a alta expressão de FASN está associada a um pior prognóstico. Recentemente demonstramos que, in vitro, a inibição específica da atividade de FASN em linhagem celular de melanoma murino, B16-F10 (i) induz a via intrínseca da apoptose, com liberação de citocromo c e ativação de caspase-3 (Zecchin et al., 2010), (ii) reduz significativamente a proliferação celular através do aumento dos níveis de p21WAF1/Cip1 e de p27Kip1 co-imunoprecipitada com cdk2, acompanhados de redução de cdk2 e Skp2, e (iii) altera a composição dos ácidos graxos livres presentes nas mitocôndrias das células B16-F10 (Zecchin et al., 2011). No entanto, não há relatos na literatura sobre os efeitos antiproliferativos da inibição de FASN in vivo. Desse modo, os principais objetivos deste trabalho são (1) analisar e comparar os efeitos in vivo e in vitro da inibição de FASN com C75 sobre os níveis de diversas proteínas envolvidas na transição das fases G0/G1 para S do ciclo celular, (2) verificar, in vivo, os níveis de apoptose e de proliferação das células de melanoma B16-F10 em camundongos tratados com C75, (3) verificar, in vitro, a especificidade da ação antiproliferativa de cerulenina e C75 através do silenciamento de FASN com RNA de interferência (RNAi) e posteriores western blottings para proteínas do ciclo celular, e (4) avaliar, in vivo, os efeitos da inibição de FASN com C75 sobre a formação e o tamanho de tumores subcutâneos de células B16-F10. (AU)