Estudo da função de ANKHD1 na proliferação, apoptose e ciclo celular em neoplasias hematológicas

Resumo

Importante passo para a compreensão dos processos fisiopatológicos das neoplasias é a identificação de genes ativamente expressos e das funções biológicas de cada proteína codificada por estes genes. A proteína Ankyrin Repeat Single KH Domain containing 1 (ANKHD1) foi inicialmente identificada em linhagem celular de adenocarcinoma de próstata, LNCaP. Recentemente, o nosso grupo de pesquisa descreveu que ANKHD1 é uma proteína citoplasmática altamente expressa em linhagens de leucemias agudas humanas e em amostras de 38 pacientes com diagnóstico de leucemia aguda, quando comparadas às células hematopoiéticas normais. Adicionalmente, através de ensaio de duplo híbrido em levedura, identificamos a associação de ANKHD1 com SIVA, uma proteína pró apoptótica que se associa a BCL-XL e p53 e através de imunoprecitação foi identificada a associação de ANKHD1 com SHP2 uma tirosina fosfatase que atua na via PI3K/Akt e MAPK. Estes dados sugerem que ANKHD1 pode estar envolvida em vias de sinalização celular essenciais para o desenvolvimento de neoplasias, de forma que os objetivos deste trabalho são confirmar a interação proteica entre ANKHD1 e SIVA e estudar se ANKHD1 exerce uma função no processo neoplásico em células leucêmicas (Jurkat e K562). A confirmação da interação entre ANKHD1 e SIVA será realizada através de hiperexpressão das mesmas em células HEK-293N, ensaios de pull down, imunoprecipitação e imunoblotting. Ensaios funcionais para o estudo da proliferação, ciclo celular, apoptose e crescimento tumoral in vivo serão realizados em células submetidas ou não à inibição da expressão de ANKHD1 através de RNAi com uso de vetor lentiviral. Ensaios de microarranjo de RNA e analises de fosfoproteoma serão utilizados para o estudo da modulação da expressão gênica e das vias de sinalização, respectivamente, induzida pela inibição de ANKHD1. Adicionalmente, a expressão de ANKHD1 será avalida em amostras de pacientes com síndrome mieloproliferativa crônica e doadores normais, através de q-PCR e western blot. (AU)