Interação entre os receptores nucleares TR (receptores de hormônios tireoidianos), PPAR (receptores ativadores da proliferação dos peroxissomos) e outras proteínas celulares

Resumo

Receptores Nucleares (RNs) são proteínas ativadas na presença de moléculas pequenas e hidrofóbicas, que após penetrarem na célula-alvo, chegam ao núcleo para iniciar a resposta celular. Eles estão envolvidos em um conjunto de patologias, como cardiopatias, diabetes, altos índices de colesterol, obesidade, as quais tem sido denominada síndrome metabólica. Sabe-se que a principal forma de atuação dos RNs ocorre pela regulação direta sobre a transcrição de genes. Esta regulação envolve a ligação dos receptores a sequências de DNA, recrutamento de correguladores, recrutamento da maquinaria transcricional, sendo este processo bastante conhecido. Entretanto, nos últimos anos, os estudos sobre mecanismos de crosstalk e transrepressão tem se tornado um foco de estudo bastante crucial no campo desses receptores. O melhor entendimento sobre a regulação da transcrição de forma não direta tem se tornado um novo desafio na tentativa de se mapear nuances diferenciais, as quais poderiam resultar em novos alvos para a regulação de diversas patologias, por exemplo. Desta forma, sabendo-se quais complexos protéicos são formados na regulação da transcrição de um gene, esta poderia ser manipulada apenas pelo impedimento da formação deste complexo. Com isso, muitos dos efeitos indesejáveis, advindos de uma regulação comum, poderiam ser evitados. Neste projeto, pretende-se mapear as interações não usuais que ocorrem entre os RNs, TR e PPAR, e quaisquer outras proteínas presentes no núcleo e citoplasma da célula, nos mecanismos de transativação e transrepressão. Este mapeamento deverá ser feito através da superexpressão destes receptores em células humanas especificas, as quais deverão receber diversos tratamentos. Os complexos formados com essas proteínas serão imunoprecipitados e posteriormente, suas proteínas serão identificadas por espectrometria de massas. Adicionalmente, serão realizados estudos de transativação em células de mamíferos, que proporcionarão respostas fisiológicas sobre o comportamento dessas proteínas separadamente ou complexadas. E aqueles complexos mais abundantes serão estudados por meio de técnicas bioquímicas e biofísicas como CD, fluorescência, gel nativo, etc. Por fim, pretende-se desenhar modelos de regulação dos receptores deste estudo, em diversas condições. (AU)