Caracterização das células t reguladoras na paracoccidioidomicose (pcm) pulmonar utilizando camundongos c57bl/6 transgênicos para a expressão de foxp3-gfp

Resumo

As células T reguladoras (Treg) podem ser classificadas em duas subpopulações principais, Treg naturais que reconhecem auto-antígenos, e Treg induzidas, linfócitos T CD4+CD25- que, através de condições estimulatórias específicas, se diferenciam em células CD4+CD25+Foxp3+ com atividade supressora e que podem reconhecer antígenos estranhos ou de agentes infecciosos. Em modelo murino isogênico de PCM desenvolvido em nosso laboratório, verificamos que células Treg exercem efeito deletério para camundongos resistentes (A/Sn) e susceptíveis (B10.A) ao fungo. A depleção destas células por anticorpo específico levou a infecção menos grave e regressiva além de patologia tecidual diminuída em ambas as linhagens. Além disso, a diminuição de células Treg acarreta a expansão de células Th17 e vice-versa1,2,3,4. No entanto, os fenômenos imunorregulatórios que controlam a PCM merecem investigações mais aprofundadas. Assim, este estudo terá como propósito caracterizar o desenvolvimento, a localização e a função de células Treg no pulmão e linfonodos drenantes de camundongos C57BL/6 (B6) transgênicos para a expressão de GFP (green fluorescent protein) sob o controle do gene Foxp3, marcador característico das células Treg. A presença de células T CD4+, T CD8+, F4/80+ (macrófagos) e células Foxp3+GFP+ será inicialmente caracterizada nos pulmões de camundongos B6-Foxp3-GFP infectados ou não pelo P. brasiliensis pela via intra-traqueal. O fenótipo e o comportamento das células Foxp3+GFP+ serão estudados após isolamento destas e transferência adotiva para camundongos RAG-/-, deficientes de células T e B. Grupos distintos destes animais receberão células T naïve (CD4+CD25-), células Treg (CD4+CD25+Foxp3+GFP+), ou ambas, e serão infectados com o fungo. A gravidade da doença será avaliada através da caracterização da carga fúngica nos tecidos, histopatologia e desenvolvimento de imunidade Th1/Th2/Th17. Estudos adicionais com camundongos depletados de células Treg por anti-CD25 monoclonal complementarão as informações sobre a importância destas células na PCM.