As vias de p53/ARF e interferon-beta como alvos de terapia gênica de carcinoma colorretal

Resumo

O câncer colorretal é o terceiro em mortalidade, e apesar das classificações moleculares, entre 30% e 40% dos pacientes apresentam recidiva após quimioterapia, o que aponta a necessidade de novas estratégias terapêuticas. É crescente o estudo de vetores virais para a terapia gênica do câncer, e dados do nosso laboratório mostraram que a entrega combinada dos genes Arf (supressor tumoral) e interferon-b (IFN², citocina imunomodulatória), via vetores adenovirais sob o controle do promotor responsivo à p53 causou indução de morte celular massiva e um efeito imunomodulatório importante. Entretanto, esses resultados foram observados em camundongos. O presente trabalho pretende avaliar se o efeito observado com esta combinação de transferência gênica se repete em modelo de carcinoma humano utilizando a linhagem HCT116 (carcinoma colorretal humano, p53-selvagem) em ensaios in vitro e in vivo. Pretendemos também iniciar trabalhos para avaliar o papel de p53 nesta resposta através do uso da linhagem isogênica, HCT116p53-/-, onde o p53 endógeno foi nocauteado. Também, montaremos um modelo ex vivo para avaliar a resposta de células dendríticas (principal direcionadora da resposta imune) e células T de pacientes com câncer e doadores saudáveis frente às linhagens tratadas com nossos vetores virais. Com este projeto, nossa abordagem de terapia gênica será avaliada em um modelo humano que revelará não apenas a resposta aos transgenes, mas também abrirá o caminho para estudar o papel de p53 em nossos tratamentos e se este tratamento poderá ativar uma resposta imunológica em modelo humano.