Identificação de proteínas de superfície de Streptococcus mutans implicadas no escape à opsonização pelo sistema complemento

Resumo

Streptococcus mutans (SM) é uma espécie bacteriana comum da cavidade bucal de humanos envolvida na patogenia da cárie dental, a qual pode promover endocardites bacterianas ao obter acesso à corrente sanguínea. Pouco se sabe, entretanto, sobre os fatores de virulência envolvidos na capacidade desta espécie de sobreviver em sangue e/ou causar infecções sistêmicas. Durante o processo de colonização e infecção do hospedeiro, SM sofre diversas alterações no seu transcriptoma em resposta aos estímulos ambientais, as quais são em parte, controladas por sistemas reguladores transcricionais de dois componentes (SDC). SDCs são tipicamente compostos por uma proteína sensora de membrana histidina quinase (K) e uma proteína intracelular reguladora (R). O SDC VicRK e o regulador órfão CovR (R sem a proteína K cognata) regulam genes de virulência associados à formação de biofilmes cariogênicos e o escape à fagocitose por PMN em sangue humano. Recentemente, verificamos que a inativação dos genes codificadores de VicK (vicK) e CovR (covR) na cepa SM UA159 prejudicam a deposição de C3b do sistema complemento, um dos principais fatores opsonizantes do sangue (Proc. 2012/50966-6). Uma vez que VicRK e CovR regulam genes codificadores de proteínas de superfície, é provável que alguns destes genes (os quais incluem wapE, lysM, 2146c, smaA, e epsC) influenciem direta ou indiretamente na deposição de C3b na superfície bacteriana. Além disto, outros genes presentes em loci aparentemente regulados por VicRK e CovR, codificam proteínas com homologia a proteases de C3 do complemento (smu.399 e pepO) e proteínas que potencialmente influenciam na deposição de C3b (smu.1247 e smu.360). O objetivo deste projeto é identificar proteínas de superfície de SM reguladas direta ou indiretamente pelo SDC VicRK e CovR, que interferem na deposição de C3b/iC3b do sistema complemento de humanos. Para isto, serão comparadas as intensidades de deposição de C3b/iC3b de soro humano sobre a superfície bacteriana e a fagocitose por PMN entre mutantes knockout de genes wapE, lysM, 2146c, smaA, epsC, smu.399 e pepO com a cepa parental. As mesmas cepas serão caracterizadas quanto à capacidade de adsorção de fibronectina, plasminogênio e fibrinogênio, componentes solúveis do sangue que influenciam na deposição de C3b/iC3b. Além disso, será avaliada a expressão destes genes em resposta a exposição de SM ao soro humano. A identificação dos componentes de superfície de SM que influenciam na opsonização por C3b/iC3b poderá contribuir para o desenvolvimento de terapias para controle de bacteremias e de infecções sistêmicas por SM. (AU)