Ativ pró-inflamatória de proteinases de venenos de serpentes: i) obtenção de proteinases recombinantes em sistema livre de CEL; ii) geração de microvesículas por monócitos estimulados com proteinases nativas e recomb e sua interação com células endoteliais

Resumo

Células liberam formas múltiplas de vesículas extracelulares, incluindo estruturas conhecidas como microvesículas (MVs), que são capazes de alterar o ambiente extracelular. Apesar do crescente número de estudos sobre MVs, sua biogênese, função e conteúdo, além dos mecanismos que regulam a entrega de seus conteúdos ainda são pouco conhecidos. MVs são geradas por diversos tipos celulares como células endoteliais, plaquetas, monócitos, células tumorais, entre outras, e podem estar envolvidas em eventos fisiológicos e patológicos, participando na comunicação célula-célula, através de interações mediadas por receptores ou por transferir moléculas bioativas, incluindo receptores de membrana, proteínas, lipídios, tRNAs, mRNAs, microRNAs e organelas. Toxinas de venenos de serpentes viperídeas induzem resposta inflamatória aguda, que contribui para a gravidade dos sintomas observados no envenenamento, possivelmente envolvendo a liberação de MVs. No entanto, a participação de MVs no quadro patológico do envenenamento ofídico não é conhecida. Sendo assim, pretendemos neste projeto analisar o efeito de MVs geradas por monócitos ativados por uma metaloproteinase (bothropasina), e uma serinoproteinase (PA-BJ) do veneno Bothrops jararaca, na forma nativa e recombinante, sobre células endoteliais. O conteúdo das diferentes MVs será avaliado utilizando abordagens proteômicas e peptidômicas a fim de compreender como a carga destas MVs pode afetar o endotélio durante o envenenamento. Ainda, o presente projeto visa à implantação da técnica de produção de toxinas recombinantes utilizando um sistema de expressão livre de célula derivado de Escherichia coli, inédito no Brasil. O sucesso no estabelecimento desse projeto no Instituto Butantan permitirá a implantação de uma plataforma para produção de proteínas de interesse acadêmico e biotecnológico.