Hipertensão secundária à alta ingestão de sal: estudo da sinalização purinérgica em células neuronais do hipotálamo e sua influência na atividade do sistema nervoso autônomo e pressão arterial

Resumo

A proposta deste projeto científico é avaliar os mecanismos da neurotransmissão purinérgica entre células neuronais e glia do núcleo hipotalâmico paraventricular (PVN) que participam diretamente do controle do sistema nervoso autônomo (SNA) e cujas alterações na sua neuroquímica estão diretamente envolvidas na gênese da hipertensão induzida por sobrecarga de sal. A alta ingestão de sal leva a aumento da osmolaridade plasmática com consequente aumento da atividade do nervo simpático (ANS) por mecanismos dependentes da ativação de neurônios do hipotálamo, em do PVN, e é um dos mecanismos pelos quais contribui para a hipertensão neurogênica induzida por sal. Recentemente, estudos do nosso laboratório demonstraram que o trifosfato de adenosina (ATP) aumenta a atividade dos neurônios do PVN e acarreta aumento da ANS por meio da ativação de receptores purinérgicos, do subtipo P2, e também de uma co-transmissão com vias glutamatérgicas. Sendo assim, nossa hipótese neste projeto é que a hipertensão e simpatoexcitação secundárias à sobrecarga de sal dependem da sinalização purinérgica no PVN, envolvendo mecanismos de interação neurônio/glia e ectonucleotidases (enzimas que metabolizam o ATP) responsáveis pela disponibilidade desta purina no microambiente neuronal deste núcleo. Este fenômeno, por sua vez, poderia ocorrer devido uma maior liberação desta purina por células gliais, como uma suposta fonte desta purina, ou por uma redução da expressão de ectonucleotidases. Desta forma, ratos Wistar serão submetidos à sobrecarga de sal (NaCl 2%) para avaliação da expressão da proteína FOS e sua co-localização com receptores P2X2 de ATP no PVN. Além disso, será avaliado se os receptores P2 participam da resposta simpato-excitatória decorrente da sobrecarga de sal. Avaliaremos se o estímulo hiperosmótico e capaz de promover liberação de ATP a nível do PVN e isto será analisado por meio de biossensores que detectam a liberação desta purina em tempo real. Para avaliar a função da glia na liberação de ATP, culturas de células do PVN serão estimuladas com solução hipertônica na presença de fluoroacetato. Será realizada a técnica de qPCR para avaliar se a sobrecarga de sal modificará a expressão de RNAm das enzimas ectonucleotidases (E-NTPDase1,2,3,8) no PVN. A função das ectonucleotidades serão avaliadas in vivo com técnicas de terapia gênica com uso de um vetor de lentivírus (LVV) para direcionar o aumento da expressão destas enzimas com alta potência de ligação à membrana neuronal chamada de transmembrane prostate acidic phosphatase (TMPAP), denominado de LVV-EF1a-TMPAP-EGFP. Neste contexto, as alterações nos parâmetros cardiovasculares serão avaliados em animais em livre movimentação com o registro da pressão arterial e frequência cardíaca pela técnica de radiotelemetria. (AU)