O papel de IRF-5 na patogênese e neurovirulência de Oropouche vírus

Resumo

O vírus Oropouche (OROV) é um arbovírus emergente transmitido em ambiente urbano pela picada de Culicoides paraensis, uma mosca hematófoga que circula no Norte e Nordeste brasileiro. Como outros arbovírus, incluindo Zika e Chikungunya, OROV causa uma doença febril exantemática associada a complicações neurológicas em uma parte dos pacientes infectados. Embora tenha sido demonstrado que OROV pode atravessar a barreira hematoencefálica e causar infecção no Sistema Nervoso Central (SNC) de camundongos neonatos e hamsters, pouco se sabe sobre os mecanismos patogenéticos associados a quebra dessa barreira. Recentemente, nosso grupo demonstrou que IRF-5, um fator de transcrição ativado após reconhecimento de PAMPs (Padrões Moleculares Associados a Patógenos), é essencial no controle da neuroinvasão por OROV. Dessa forma, o objetivo deste projeto é caracterizar como IRF-5 controla a neuroinvasão por OROV. Para tanto, caracterizaremos a infecção por OROV e a expressão de RNAs totais por RNAseq em PBMCs (células polimorfonucleares) e culturas primárias de endotélio cerebral de animais selvagens e nocautes para IRF-5. Além disso examinaremos a integridade da barreira endotelial em experimentos de transwell com linhagens estabelecidas e culturas primárias de células endoteliais, medindo a resistência elétrica transendotelial (TEER), a quantidade de vírus que consegue cruzar a monocamada e a integridade das junções oclusivas por microscopia confocal. Esses experimentos serão conduzidos na presença e ausência de vírus e do sobrenadante de PBMCs infectados artificialmente. Por fim, analisaremos a mortalidade e o tropismo viral em animais que não expressam IRF-5 em macrófagos, células dendríticas e endotélio, utilizando o sistema Cre/LoxP de recombinação. (AU)